詳細介紹
產品名稱:大鼠維生素B12
英文名稱:Rat Vitamin B12,VB12 ELISA KIT
產品規(guī)格:96人份/48人份
保存條件:2-8℃
檢測方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
產品用途:For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免費代測服務.
產品種屬齊全有:人,小鼠,,大鼠,,豚鼠,豬,,犬,,兔,牛,,羊,,猴,兔,,馬等動物種屬,。
待檢樣本:體液,血清,,血漿,,細胞培養(yǎng)上清液,尿液,,組織勻漿,心房水標本等等,。
大鼠維生素B12 顯色和比色
(1) 顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應,此時酶催化無色的底物生成有色的產物,。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素,。在一定時間內,陰性孔可保持無色,,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強,。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中,,加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確,。定性測定的顯色可在室溫進行,時間一般不需要嚴格控制,,有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間,,及時判斷,。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鐘后即不再加深,再延長反應時間,,可使本底值增高,。OPD底物液受光照會自行變色,顯色反應應避光進行,,顯色反應結束時加入終止液終止反應,。OPD產物用硫酸終止后,顯色由橙黃色轉向棕黃色,。 TMB受光照的影響不大,,可在室溫中置于操作臺上,邊反應觀察結果,。但為保證實驗結果的穩(wěn)定性,,宜在規(guī)定的適當時間閱讀結果。TMB經HRP作用后,,約40分鐘顯色達,,隨即逐漸減弱,至2小時后即可*消退至無色,。TMB的終止液有多種,,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24小時)不褪,,是目視判斷的良好終止劑,。此外,各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色,,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值,。
(2) 比色
比色前應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中,。以軟板為載體的試驗,,需先將板置于標準96孔的座架中,才可進行比色,。在加底物液顯色前,,先將軟板邊緣剪凈,這樣,,此板就可*平妥坐入座架中。比色時應先以蒸餾水校零點,,測讀底物孔(未經任何反應僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔),,以記錄本次試驗的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點,,以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,,然后進行計算,。比色結果的表達以往通用光密度(oplical density,OD),,現(xiàn)按規(guī)定用吸光度(absorbence,,A),兩者含義相同,。通常的表示方法是,,將吸收波長寫于A字母的右下角,如OPD的吸收波長為492nm,,表示方法為"A492nm"或"OD492nm",。