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產(chǎn)品名稱:大鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑
英文名稱:Rat Visceral adipose-specific serine protease inhibitor,vaspin ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
各種種屬:人,、大小鼠、豚鼠,、兔子,、豬、犬,、牛,、羊…
標本齊全:血清、血漿,、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿、組織液,、關(guān)節(jié)液,、胸腔溢液等…
經(jīng)營品牌:美國RD分裝,原裝,、美國RB原裝
保存條件:2-8℃
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上海恒遠生物科技有限公司銷售各種ELISA試劑盒,,有RD,RB原裝,,標本齊全,,提供代測。如有疑問,,可與上海恒遠銷售或技術(shù) 負責人:王
大鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑 ELISA技術(shù)操作要點,,結(jié)合物
酶標記的抗原或抗體稱為結(jié)合物(conjugate)??乖捎诨瘜W結(jié)構(gòu)不同,,可用不同的方法與酶結(jié)合。如為蛋白質(zhì)抗原,,基本上可參考抗體酶標記的方法,。制備抗體酶結(jié)合物的方法通常有以下幾種,。
1.戊二醛交聯(lián)法戊二醛是一種雙功能團試劑,可以使酶與蛋白質(zhì)或其他抗原的氨基通過它而偶聯(lián),。戊二醛交聯(lián)可用一步法(如連接AP),,也可用二步法(如連接HRP)。舉例如下:
2~5mg純抗體與5mgAP混合于0.1mol/LpH6.8的磷酸緩沖液1ml中,,4℃下對同上緩沖液透析平衡,。磁力攪拌下,緩慢加入1%戊二醛0.05ml,,在室溫下放置2小時,。在4℃下對0.05mol/LpH8.0Tris緩沖液透析平衡,即得酶標抗體,。
辣根過氧化物酶可溶解于50%飽和度硫酸銨中,。用上法交聯(lián)后可用50%飽和度硫酸銨沉淀酶標抗體,棄去上清中游離酶,。
戊二醛一步法操作簡便,、有效,而且重復性好,。缺點是交聯(lián)時分子間的比例不嚴格,,大小也不一,影響效果,。
制備HRP抗體結(jié)合物也可用二步法,,即先將HRP與戊二醛作用,透析除去戊二醛,,在pH9.5緩沖液中再與抗體作用而形成酶標抗體。此法的效率可高于一步法10倍左右,。
2.過碘酸鹽氧化法本法只用于HRP的交聯(lián),。該酶含18%碳水化合物,過碘酸鹽將其分子表面的多糖氧化為醛基,。用硼氫化鈉(NaBH4)中和多余的過碘酸,。酶上的醛根很活潑,可與蛋白質(zhì)結(jié)合,,形成按摩爾比例結(jié)合的酶標結(jié)合物,。有人認為此法為辣根過氧化物酶交聯(lián)zui有效的方法。但也有只認為由于所用試劑較為劇烈,,各批實驗結(jié)果不易重復,。
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