ELISA試劑盒,，ELISPOT試劑盒

大鼠尿激酶試劑盒 Rat urokinase,UK ELISA KIT

可測(cè)種屬：人、大小鼠,、豚鼠,、兔子、豬,、犬,、猴、馬…
可測(cè)標(biāo)本：血清,、血漿,、細(xì)胞上清液、尿液,、體液,、灌洗液
規(guī)格：96T/48T 中英文雙版說(shuō)明書(shū) 提供代測(cè) 科研試劑
經(jīng)營(yíng)品牌：RD、RB,、IBL
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃,。
2．有效期：6個(gè)月
運(yùn)輸條件：低溫運(yùn)輸，用干冰或者冰袋低溫運(yùn)輸,。

大鼠尿激酶 ELISA技術(shù)操作要點(diǎn)，酶和底物
ELISA中所用的酶要求純度高,、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高,、專一性強(qiáng)、性質(zhì)穩(wěn)定、來(lái)源豐富,、價(jià)格不貴,、制備成的酶標(biāo)抗體或抗原性質(zhì)穩(wěn)定，繼續(xù)保留著它的活性部分和催化能力,。在受檢標(biāo)本中不存在與標(biāo)記酶相同的酶,。另外它的相應(yīng)底物應(yīng)易于制備和保存，價(jià)格低廉,，有色產(chǎn)物易于測(cè)定,，光吸收高。ELISA中zui常用的酶為辣根過(guò)氧化酶（HRP）和從牛腸粘膜或大腸桿菌提取的堿性磷酸酶（AP）,。
HRP在蔬菜作物辣根中含量很高,，純化方法也不復(fù)雜。它是一種糖蛋白,，含糖量約18％,；分子量為44kD；是一種復(fù)合酶,，由主酶（酶蛋白）和輔基（亞鐵血紅素）結(jié)合而成的一種卟啉蛋白質(zhì),。主酶為無(wú)色糖蛋白，在275nm波長(zhǎng)處有zui高吸收峰,；輔基是深棕色的含鐵卟啉環(huán),，在403nm波長(zhǎng)處有zui高吸收峰。
ELISA技術(shù)操作要點(diǎn),，結(jié)合物
酶標(biāo)記的抗原或抗體稱為結(jié)合物（conjugate）,。抗原由于化學(xué)結(jié)構(gòu)不同,，可用不同的方法與酶結(jié)合,。如為蛋白質(zhì)抗原，基本上可參考抗體酶標(biāo)記的方法,。制備抗體酶結(jié)合物的方法通常有以下幾種,。
1．戊二醛交聯(lián)法戊二醛是一種雙功能團(tuán)試劑，可以使酶與蛋白質(zhì)或其他抗原的氨基通過(guò)它而偶聯(lián),。戊二醛交聯(lián)可用一步法（如連接AP）,，也可用二步法（如連接HRP）。舉例如下：
2～5mg純抗體與5mgAP混合于0.1mol/LpH6.8的磷酸緩沖液1ml中,，4℃下對(duì)同上緩沖液透析平衡,。磁力攪拌下，緩慢加入1％戊二醛0.05ml,，在室溫下放置2小時(shí),。在4℃下對(duì)0.05mol/LpH8.0Tris緩沖液透析平衡,，即得酶標(biāo)抗體。
辣根過(guò)氧化物酶可溶解于50％飽和度硫酸銨中,。用上法交聯(lián)后可用50％飽和度硫酸銨沉淀酶標(biāo)抗體,，棄去上清中游離酶。
戊二醛一步法操作簡(jiǎn)便,、有效,，而且重復(fù)性好。缺點(diǎn)是交聯(lián)時(shí)分子間的比例不嚴(yán)格,，大小也不一,，影響效果。
制備HRP抗體結(jié)合物也可用二步法,，即先將HRP與戊二醛作用,，透析除去戊二醛，在pH9.5緩沖液中再與抗體作用而形成酶標(biāo)抗體,。此法的效率可高于一步法10倍左右,。
2．過(guò)碘酸鹽氧化法本法只用于HRP的交聯(lián)。該酶含18％碳水化合物,，過(guò)碘酸鹽將其分子表面的多糖氧化為醛基,。用硼氫化鈉（NaBH4）中和多余的過(guò)碘酸。酶上的醛根很活潑,，可與蛋白質(zhì)結(jié)合,，形成按摩爾比例結(jié)合的酶標(biāo)結(jié)合物。有人認(rèn)為此法為辣根過(guò)氧化物酶交聯(lián)zui有效的方法,。但也有只認(rèn)為由于所用試劑較為劇烈,，各批實(shí)驗(yàn)結(jié)果不易重復(fù)。

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