詳細介紹
產(chǎn)品名稱:小鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA試劑盒
英文名稱:Mouse anti-alpha-Fodrin IgG/IgA,α-Fodrin IgG/IgA ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
保存條件:2-8℃
檢測方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
產(chǎn)品用途:For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免費代測服務(wù).
產(chǎn)品種屬齊全有:人,,小鼠,,大鼠,豚鼠,,豬,,犬,兔,,牛,,羊,猴,,兔,,馬等動物種屬。
待檢樣本:體液,,血清,,血漿,細胞培養(yǎng)上清液,,尿液,,組織勻漿,心房水標本等等。
小鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA試劑盒 顯色和比色
(1) 顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng),,此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物,。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi),,陰性孔可保持無色,,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行,。在定量測定中,,加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行,,時間一般不需要嚴格控制,,有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應(yīng)時間,及時判斷,。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,,再延長反應(yīng)時間,,可使本底值增高,。OPD底物液受光照會自行變色,顯色反應(yīng)應(yīng)避光進行,,顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng),。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色,。 TMB受光照的影響不大,,可在室溫中置于操作臺上,邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性,,宜在規(guī)定的適當時間閱讀結(jié)果,。TMB經(jīng)HRP作用后,約40分鐘顯色達,,隨即逐漸減弱,,至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種,,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止,。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24小時)不褪,是目視判斷的良好終止劑,。此外,,各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值,。
(2) 比色
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,,然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗,,需先將板置于標準96孔的座架中,,才可進行比色。在加底物液顯色前,,先將軟板邊緣剪凈,,這樣,此板就可*平妥坐入座架中,。比色時應(yīng)先以蒸餾水校零點,,測讀底物孔(未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔),以記錄本次試驗的試劑狀況,。其后可用空白孔以蒸餾水校零點,,以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,然后進行計算,。比色結(jié)果的表達以往通用光密度(oplical density,,OD),現(xiàn)按規(guī)定用吸光度(absorbence,,A),,兩者含義相同。通常的表示方法是,,將吸收波長寫于A字母的右下角,,如OPD的吸收波長為492nm,表示方法為"A492nm"或"OD492nm",。
(3) 酶標比色儀
酶標比色儀簡稱酶標儀,,通常指于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計,。針對固相載體形式的不同,各有特制的適用于板,、珠和小試管的設(shè)計,。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標儀。酶標儀的主要性能指標有:測讀速度,、讀數(shù)的準確性,、重復(fù)性、精確度和可測范圍,、線性等等,。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可精確到0.001,準確性為±1%,,重復(fù)性達0.5%,。舉例說,若某孔測得的A值為1.083,,則該孔相對于空氣的真實A值應(yīng)為1.083±0.01(1.073~1.093),,重復(fù)測定數(shù)次,其A值均應(yīng)1.083±0.05(1.078~1.088)在之間,。酶標儀的可測范圍視各酶標儀的性能而不同,。普通的酶標儀在0.000~2.000,新型號的酶標儀上限拓寬達2.900,,甚至更高,。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示。應(yīng)注意可測范圍與線性范圍的不同,,線性范圍常小于可測范圍,,比如某一酶標儀的可測范圍為0.000~2.900,而其線性范圍僅0.000~2.000,,這在定量ELISA中制作標準曲線時應(yīng)予注意,。 酶標儀不應(yīng)安置在陽光或強光照射下,操作時室溫宜在15~30℃,,使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘,,測讀結(jié)果更穩(wěn)定。測讀A值時,,要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,,如OPD用492nm波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀,,即每孔先后測讀兩次,,*次在zui適波長(W1),,第二次在不敏感波長(W2),,兩次測定間不移動ELISA板的位置,。例如OPD用492nm為W1,630nm為W2,,zui終測得的A值為兩者之差(W1-W2),。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。各種酶標儀性能有所不同,,使用中應(yīng)詳細新聞記者說明書,。