詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M試劑盒
英文名稱:Mouse Linker for activation of T cell,LAT ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
保存條件:2-8℃
檢測方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
檢測范圍:詳見說明書
主要作用:科研
待檢樣本:體液,,血清,血漿,,細(xì)胞培養(yǎng)上清液,,尿液,組織勻漿,心房水標(biāo)本等等,。
檢測目標(biāo):人,,小鼠,大鼠,,豚鼠,,豬,,犬,兔,,牛,,羊,猴,,兔,,馬等動(dòng)物種屬。
小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白試劑盒 結(jié)果判斷
定性測定
定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答,,分別用"陽性",、"陰性"表示。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng),。"陰性"則為無反應(yīng),。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度,,其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn),。在這種半定量測定中,將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn),,呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度,。根據(jù)滴度的高低,可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱,,這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性,、弱陽性更具定量意義。 在間接法和夾心法ELSIA中,,陽性孔呈色深于陰性孔,。在競爭法ELISA中則相反,陰性孔呈色深于陽性孔,。兩類反應(yīng)的結(jié)果判斷方法不同,,分述于下。
(1) 間接法和夾心法
這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷,。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性,,顯色清晰者為陽性。但在ELSIA中,,正常人血清反應(yīng)后??沙霈F(xiàn)呈色的本底,此本底的深淺因試劑的組成和實(shí)驗(yàn)的條件不同而異,,因此實(shí)驗(yàn)中必須加測陰性對照,。陰性對照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6)。在用肉眼判斷結(jié)果時(shí),,更宜用顯色深于陰性對照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo),。目視法簡捷明了,,但頗具主觀性。在條件許可下,,應(yīng)該用比色計(jì)測定吸光值,,這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本(sample,,S),、陽性對照(P)、和陰性對照(N)的吸光值,,然后進(jìn)行計(jì)算,。計(jì)算方法有多種,大致可分為陽性判定值法和標(biāo)本與陰性對照比值法兩類,。
a. 陽性判定值
陽性判定值(cut-off value)一般為陰性對照A值加上一個(gè)特定的常數(shù),以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn),。用此法判斷結(jié)果要求實(shí)驗(yàn)條件十分恒定,,試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化,陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一定的規(guī)格,,須配用精密的儀器,,并嚴(yán)格按規(guī)定操作。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)檢測而得到的?,F(xiàn)舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例,。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿,陽性對照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml,。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽性對照和3個(gè)陰性對照,。測得A值后,先計(jì)算陰性對照A值的平均數(shù)(NCX)和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX),,兩個(gè)平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個(gè)特定的數(shù)值(例0.400),,試驗(yàn)才有效。3個(gè)陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX,,并≤1.5×NCX,,如其中之一超出此范圍,則棄去,,而已另兩個(gè)陰性對照重新計(jì)算NCX,;如有兩個(gè)陰性對照A值超出以上范圍,則該次實(shí)驗(yàn)無效,。陽性判定值按下式計(jì)算:
陽性判定值=NCX+0.05 標(biāo)本A值>陽性判定值的為陽性,,小于陽性判定值的為陰性。應(yīng)注意的是,,式中0.05為該試劑盒的常數(shù),,只適合于該特定條件下,,而不是對各種試劑均可通用。
根據(jù)以上敘述可以看出,,在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗(yàn)的質(zhì)控作用,,試劑變質(zhì)和操作不當(dāng)均會(huì)產(chǎn)生"試驗(yàn)無效"的后果。
b.標(biāo)本/陰性對照比值
在實(shí)驗(yàn)條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,,這種判斷法較為合適,。在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的A值后,計(jì)算S/N值,。也有寫作P/N的,,這里的P不代表陽性(positive),而是病人(patient)的縮寫,,不應(yīng)誤解,。為避免混淆,更宜用S/N表示,。在早期的間接法ELISA中,,有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)多為各種測定所沿用,。實(shí)際上每一測定系統(tǒng)應(yīng)該用實(shí)驗(yàn)求出各自的S/N的閾值,。更應(yīng)注意的是,N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清,。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,,以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此,,這類試
b. 抑制率法
抑制率表示標(biāo)本在競爭結(jié)合中標(biāo)本對陰性反應(yīng)顯色的抑制程度,,按下式計(jì)算:抑制率(%)= (陰性對照A值-標(biāo)本A值)×100%/陰性對照A值.一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性,<50%為陰性,。
定量測定
ELSIA操作步驟復(fù)雜,,影響反應(yīng)因素較多,特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的*,,因此在定量測定中,,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,,曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0,繪制時(shí)常用半對數(shù)紙,,以檢測物的濃度為橫坐標(biāo),,以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點(diǎn)連接,,所得曲線一般呈S形,,其頭,、尾部曲線趨于平坦,中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域,。
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