詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:小鼠補體1抑制物抗體試劑盒
英文名稱:Mouse Complement 1 inhibitor autoantibody,C1INH ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
保存條件:2-8℃
檢測方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
檢測范圍:詳見說明書
主要作用:科研
待檢樣本:體液,血清,,血漿,,細(xì)胞培養(yǎng)上清液,尿液,,組織勻漿,心房水標(biāo)本等等,。
檢測目標(biāo):人,小鼠,,大鼠,,豚鼠,豬,,犬,,兔,牛,,羊,,猴,兔,,馬等動物種屬,。
小鼠補體1抑制物抗體試劑盒 結(jié)果判斷
定性測定
定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答,分別用"陽性",、"陰性"表示,。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng),。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,,即用滴度來表示反應(yīng)的強度,其實質(zhì)仍是一個定性試驗,。在這種半定量測定中,,將標(biāo)本作一系列稀釋后進行試驗,呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度,。根據(jù)滴度的高低,,可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強弱,這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強陽性,、弱陽性更具定量意義,。 在間接法和夾心法ELSIA中,陽性孔呈色深于陰性孔,。在競爭法ELISA中則相反,,陰性孔呈色深于陽性孔。兩類反應(yīng)的結(jié)果判斷方法不同,,分述于下,。
(1) 間接法和夾心法
這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷,。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性,顯色清晰者為陽性,。但在ELSIA中,,正常人血清反應(yīng)后常可出現(xiàn)呈色的本底,,此本底的深淺因試劑的組成和實驗的條件不同而異,,因此實驗中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6),。在用肉眼判斷結(jié)果時,,更宜用顯色深于陰性對照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。目視法簡捷明了,,但頗具主觀性,。在條件許可下,應(yīng)該用比色計測定吸光值,,這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù),。先讀出標(biāo)本(sample,S),、陽性對照(P),、和陰性對照(N)的吸光值,然后進行計算,。計算方法有多種,,大致可分為陽性判定值法和標(biāo)本與陰性對照比值法兩類。
a. 陽性判定值
陽性判定值(cut-off value)一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù),,以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn),。用此法判斷結(jié)果要求實驗條件十分恒定,,試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化,,陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一定的規(guī)格,須配用精密的儀器,,并嚴(yán)格按規(guī)定操作,。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標(biāo)本的實驗檢測而得到的。現(xiàn)舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例,。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿,,陽性對照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml。每次試驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照,。測得A值后,,先計算陰性對照A值的平均數(shù)(NCX)和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX),兩個平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個特定的數(shù)值(例0.400),,試驗才有效,。3個陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX,,并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,,則棄去,,而已另兩個陰性對照重新計算NCX;如有兩個陰性對照A值超出以上范圍,,則該次實驗無效,。陽性判定值按下式計算:
陽性判定值=NCX+0.05 標(biāo)本A值>陽性判定值的為陽性,小于陽性判定值的為陰性,。應(yīng)注意的是,,式中0.05為該試劑盒的常數(shù),只適合于該特定條件下,,而不是對各種試劑均可通用,。
根據(jù)以上敘述可以看出,在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質(zhì)控作用,,試劑變質(zhì)和操作不當(dāng)均會產(chǎn)生"試驗無效"的后果,。
b.標(biāo)本/陰性對照比值
在實驗條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,這種判斷法較為合適,。在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的A值后,,計算S/N值。也有寫作P/N的,,這里的P不代表陽性(positive),,而是病人(patient)的縮寫,不應(yīng)誤解,。為避免混淆,,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中,,有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準(zhǔn),,現(xiàn)多為各種測定所沿用。實際上每一測定系統(tǒng)應(yīng)該用實驗求出各自的S/N的閾值,。更應(yīng)注意的是,,N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,,以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多,。因此,這類試
b. 抑制率法
抑制率表示標(biāo)本在競爭結(jié)合中標(biāo)本對陰性反應(yīng)顯色的抑制程度,,按下式計算:抑制率(%)= (陰性對照A值-標(biāo)本A值)×100%/陰性對照A值.一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性,,<50%為陰性。
定量測定
ELSIA操作步驟復(fù)雜,,影響反應(yīng)因素較多,,特別是固相載體的包被難達到各個體之間的*,,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,曲線zui高點的吸光度可接近2.0,,繪制時常用半對數(shù)紙,,以檢測物的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),,將各濃度的值逐點連接,,所得曲線一般呈S形,其頭,、尾部曲線趨于平坦,,中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。
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