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產(chǎn)品名稱：小鼠8異前列腺素試劑盒

英文名稱：Mouse 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA KIT

使用范圍：科研
產(chǎn)品規(guī)格：96人份/48人份
各種種屬：人、大小鼠,、豚鼠,、兔子、豬,、犬,、牛、羊…
標本齊全：血清,、血漿,、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿,、組織液,、關節(jié)液、胸腔溢液等…
經(jīng)營品牌:美國ＲＤ?。遥隆,。桑拢?br />保存條件：2-8℃
有效期：６個月
運輸條件：低溫運輸，用干冰或者冰袋低溫運輸,。

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洗滌
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,，但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的,。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,，而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來,。可以說在ELISA操作中，洗滌是zui主要的關鍵技術(shù),，應引起操作者的高度重視,，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎,。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種，過程如下：
（1）浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應液,；b.用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后,，即甩去）；c.浸泡,，即將洗滌液注滿板孔,，放置1-2分鐘，間歇搖動,，浸泡時間不可隨意縮短,；d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應*,，可用水泵或真空泵抽吸,，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；e.重復操作c和d,，洗滌3-4次（或按說明規(guī)定）,。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間,。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法,。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,，非離子型洗滌劑既含疏水基團,，也含親水基團，其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結(jié)合,，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,，并借助于親水基團和水分子的結(jié)合作用，使蛋白質(zhì)回復到水溶液狀態(tài),，從而脫離固相載體,。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間,，高于0.2%時,，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
（2）流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水,。洗滌時附接一特殊裝置,，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗，持續(xù)沖洗2分鐘后,，吸干液體,，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可,。浸泡式猶如盆浴,，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為*,，且也簡便,、快速。已有實驗表明,，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌,。洗滌時設法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面,，洗滌效果更佳,。

顯色和比色
（1） 顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應，此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物,。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素,。在一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色,，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行,。在定量測定中,，加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行,，時間一般不需要嚴格控制,，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間，及時判斷,。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鐘后即不再加深,，再延長反應時間，可使本底值增高,。OPD底物液受光照會自行變色,，顯色反應應避光進行，顯色反應結(jié)束時加入終止液終止反應,。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。 TMB受光照的影響不大,，可在室溫中置于操作臺上,，邊反應觀察結(jié)果,。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當時間閱讀結(jié)果,。TMB經(jīng)HRP作用后,，約40分鐘顯色達，隨即逐漸減弱,，至2小時后即可*消退至無色,。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應終止,。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24小時）不褪,，是目視判斷的良好終止劑。此外,，各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色,，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。
（2） 比色
比色前應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,，然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中,。以軟板為載體的試驗，需先將板置于標準96孔的座架中,，才可進行比色,。在加底物液顯色前，先將軟板邊緣剪凈,，這樣,，此板就可*平妥坐入座架中。比色時應先以蒸餾水校零點,，測讀底物孔（未經(jīng)任何反應僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔）,，以記錄本次試驗的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點,，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,，然后進行計算。比色結(jié)果的表達以往通用光密度（oplical density,，OD）,，現(xiàn)按規(guī)定用吸光度（absorbence，A）,，兩者含義相同,。通常的表示方法是，將吸收波長寫于A字母的右下角,，如OPD的吸收波長為492nm,，表示方法為"A492nm"或"OD492nm"。
（3） 酶標比色儀
酶標比色儀簡稱酶標儀,，通常指于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計,。針對固相載體形式的不同,，各有特制的適用于板、珠和小試管的設計,。許多試劑公司配套供應酶標儀,。酶標儀的主要性能指標有：測讀速度、讀數(shù)的準確性,、重復性,、精確度和可測范圍、線性等等,。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可精確到0.001,，準確性為±1%，重復性達0.5%,。舉例說,，若某孔測得的A值為1.083，則該孔相對于空氣的真實A值應為1.083±0.01（1.073~1.093）,，重復測定數(shù)次,，其A值均應1.083±0.05（1.078~1.088）在之間。酶標儀的可測范圍視各酶標儀的性能而不同,。普通的酶標儀在0.000~2.000,，新型號的酶標儀上限拓寬達2.900，甚至更高,。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示,。應注意可測范圍與線性范圍的不同，線性范圍常小于可測范圍,，比如某一酶標儀的可測范圍為0.000~2.900,，而其線性范圍僅0.000~2.000，這在定量ELISA中制作標準曲線時應予注意,。 酶標儀不應安置在陽光或強光照射下，操作時室溫宜在15~30℃,，使用前先預熱儀器15-30分鐘,，測讀結(jié)果更穩(wěn)定。測讀A值時,，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,，如OPD用492nm波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀,，即每孔先后測讀兩次,，*次在zui適波長（W1），第二次在不敏感波長（W2）,，兩次測定間不移動ELISA板的位置,。例如OPD用492nm為W1,，630nm為W2，zui終測得的A值為兩者之差（W1-W2）,。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。各種酶標儀性能有所不同，使用中應詳細新聞記者說明書,。

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