產(chǎn)品名稱：小鼠腫瘤壞死因子β試劑盒

英文名稱：Mouse Tumor necrosis factor β,TNF-β ELISA KIT

產(chǎn)品規(guī)格：96人份/48人份
保存條件：2-8℃
檢測方法：酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）
產(chǎn)品用途：For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免費代測服務(wù).
產(chǎn)品種屬齊全有：人，小鼠,，大鼠,，豚鼠，豬,，犬，兔,，牛,，羊，猴,，兔,，馬等動物種屬。
待檢樣本：體液,，血清,，血漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液,，尿液,，組織勻漿,心房水標(biāo)本等等。

小鼠腫瘤壞死因子β試劑盒 顯色和比色
（1） 顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng),，此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物,。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi),，陰性孔可保持無色,，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進行,。在定量測定中,，加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確,。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴(yán)格控制,，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時間,，及時判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,，再延長反應(yīng)時間,，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進行,，顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色,。 TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上,，邊反應(yīng)觀察結(jié)果,。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當(dāng)時間閱讀結(jié)果,。TMB經(jīng)HRP作用后,，約40分鐘顯色達，隨即逐漸減弱,，至2小時后即可*消退至無色,。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止,。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長時間（12-24小時）不褪,，是目視判斷的良好終止劑。此外,，各類酸性終止液則會使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。
（2） 比色
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,，然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中,。以軟板為載體的試驗，需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中,，才可進行比色,。在加底物液顯色前，先將軟板邊緣剪凈,，這樣,，此板就可*平妥坐入座架中。比色時應(yīng)先以蒸餾水校零點,，測讀底物孔（未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過程的孔）,，以記錄本次試驗的試劑狀況,。其后可用空白孔以蒸餾水校零點，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,，然后進行計算,。比色結(jié)果的表達以往通用光密度（oplical density，OD）,，現(xiàn)按規(guī)定用吸光度（absorbence,，A），兩者含義相同,。通常的表示方法是,，將吸收波長寫于A字母的右下角，如OPD的吸收波長為492nm,，表示方法為"A492nm"或"OD492nm",。
（3） 酶標(biāo)比色儀
酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀，通常指于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計,。針對固相載體形式的不同,，各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計,。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀,。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性,、重復(fù)性,、精確度和可測范圍、線性等等,。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到0.001，準(zhǔn)確性為±1%,，重復(fù)性達0.5%,。舉例說，若某孔測得的A值為1.083,，則該孔相對于空氣的真實A值應(yīng)為1.083±0.01（1.073~1.093）,，重復(fù)測定數(shù)次，其A值均應(yīng)1.083±0.05（1.078~1.088）在之間,。酶標(biāo)儀的可測范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同,。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000，新型號的酶標(biāo)儀上限拓寬達2.900,，甚至更高,。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示。應(yīng)注意可測范圍與線性范圍的不同,，線性范圍常小于可測范圍,，比如某一酶標(biāo)儀的可測范圍為0.000~2.900,，而其線性范圍僅0.000~2.000，這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時應(yīng)予注意,。 酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強光照射下,，操作時室溫宜在15~30℃，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘,，測讀結(jié)果更穩(wěn)定,。測讀A值時，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,，如OPD用492nm波長,。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測讀，即每孔先后測讀兩次,，*次在zui適波長（W1）,，第二次在不敏感波長（W2），兩次測定間不移動ELISA板的位置,。例如OPD用492nm為W1,，630nm為W2，zui終測得的A值為兩者之差（W1-W2）,。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。各種酶標(biāo)儀性能有所不同，使用中應(yīng)詳細(xì)新聞記者說明書,。

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