ＥＬＩＳＡ試劑盒?。牛蹋桑樱翙z測試劑盒　ＥＬＩＳＡ?。耍桑?/p>

產(chǎn)品名稱：小鼠孤腓肽試劑盒

英文名稱：Mouse orphanin FQ/nociceptin,OFQ/N ELISA KIT

使用范圍：科研
產(chǎn)品規(guī)格：96人份/48人份
各種種屬：人,、大小鼠、豚鼠,、兔子,、豬、犬,、牛、羊…
標(biāo)本齊全：血清,、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿,、組織液,、關(guān)節(jié)液,、胸腔溢液等…
經(jīng)營品牌:美國ＲＤ　ＲＢ?。桑拢?br />保存條件：2-8℃
有效期：６個(gè)月
運(yùn)輸條件：低溫運(yùn)輸,，用干冰或者冰袋低溫運(yùn)輸。

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洗滌
洗滌在ELISA過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,，但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗,。ELSIA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì),。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來,?？梢哉f在ELISA操作中，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),，應(yīng)引起操作者的高度重視,，操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌，不得馬虎,。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動(dòng)洗滌儀外,，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種，過程如下：
（1）浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液,；b.用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后,，即甩去）；c.浸泡,，即將洗滌液注滿板孔,，放置1-2分鐘，間歇搖動(dòng),，浸泡時(shí)間不可隨意縮短,；d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*,，可用水泵或真空泵抽吸,，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；e.重復(fù)操作c和d,，洗滌3-4次（或按說明規(guī)定）,。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時(shí)間,。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法,。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),，也含親水基團(tuán),，其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,，并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體,。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時(shí),，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度,。
（2）流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水,。洗滌時(shí)附接一特殊裝置,，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗，持續(xù)沖洗2分鐘后,，吸干液體,，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可,。浸泡式猶如盆浴,，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為*,，且也簡便,、快速。已有實(shí)驗(yàn)表明,，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌,。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面,，洗滌效果更佳,。

顯色和比色
（1） 顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng)，此時(shí)酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物,。反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍是影響顯色的因素,。在一定時(shí)間內(nèi)，陰性孔可保持無色,，而陽性孔則隨時(shí)間的延長而呈色加強(qiáng),。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進(jìn)行。在定量測定中,，加入底物后的反應(yīng)溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確,。定性測定的顯色可在室溫進(jìn)行,，時(shí)間一般不需要嚴(yán)格控制，有時(shí)可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時(shí)間,，及時(shí)判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,，再延長反應(yīng)時(shí)間,，可使本底值增高。OPD底物液受光照會(huì)自行變色,，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行,，顯色反應(yīng)結(jié)束時(shí)加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色,。 TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺(tái)上,，邊反應(yīng)觀察結(jié)果,。但為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當(dāng)時(shí)間閱讀結(jié)果,。TMB經(jīng)HRP作用后,，約40分鐘顯色達(dá)，隨即逐漸減弱,，至2小時(shí)后即可*消退至無色,。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止,。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長時(shí)間（12-24小時(shí)）不褪,，是目視判斷的良好終止劑。此外,，各類酸性終止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,，此時(shí)可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。
（2） 比色
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,，然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中,。以軟板為載體的試驗(yàn)，需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中,，才可進(jìn)行比色,。在加底物液顯色前，先將軟板邊緣剪凈,，這樣,，此板就可*平妥坐入座架中,。比色時(shí)應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn),，測讀底物孔（未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過程的孔），以記錄本次試驗(yàn)的試劑狀況,。其后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn)，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,，然后進(jìn)行計(jì)算,。比色結(jié)果的表達(dá)以往通用光密度（oplical density，OD）,，現(xiàn)按規(guī)定用吸光度（absorbence,，A），兩者含義相同,。通常的表示方法是,，將吸收波長寫于A字母的右下角，如OPD的吸收波長為492nm,，表示方法為"A492nm"或"OD492nm",。
（3） 酶標(biāo)比色儀
酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀，通常指于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計(jì),。針對固相載體形式的不同,，各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計(jì),。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀,。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性,、重復(fù)性,、精確度和可測范圍、線性等等,。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到0.001,，準(zhǔn)確性為±1%，重復(fù)性達(dá)0.5%,。舉例說,，若某孔測得的A值為1.083，則該孔相對于空氣的真實(shí)A值應(yīng)為1.083±0.01（1.073~1.093）,，重復(fù)測定數(shù)次,，其A值均應(yīng)1.083±0.05（1.078~1.088）在之間。酶標(biāo)儀的可測范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同,。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000,，新型號(hào)的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900，甚至更高,。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號(hào)表示,。應(yīng)注意可測范圍與線性范圍的不同，線性范圍常小于可測范圍,，比如某一酶標(biāo)儀的可測范圍為0.000~2.900,，而其線性范圍僅0.000~2.000,，這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)予注意。 酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下,，操作時(shí)室溫宜在15~30℃,，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定,。測讀A值時(shí),，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波長,。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測讀，即每孔先后測讀兩次,，*次在zui適波長（W1）,，第二次在不敏感波長（W2），兩次測定間不移動(dòng)ELISA板的位置,。例如OPD用492nm為W1,，630nm為W2，zui終測得的A值為兩者之差（W1-W2）,。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。各種酶標(biāo)儀性能有所不同，使用中應(yīng)詳細(xì)新聞?dòng)浾哒f明書,。

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