詳細(xì)介紹
ELISA試劑盒?。牛蹋桑樱翙z測試劑盒 ELISA?。耍桑?/p>
產(chǎn)品名稱:小鼠α1微球蛋白試劑盒
英文名稱:Mouse α1-microglobulin,α1-MG ELISA KIT
使用范圍:科研
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
各種種屬:人,、大小鼠、豚鼠,、兔子,、豬、犬,、牛,、羊…
標(biāo)本齊全:血清、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿、組織液,、關(guān)節(jié)液,、胸腔溢液等…
經(jīng)營品牌:美國RD RB?。桑拢?br />保存條件:2-8℃
有效期:6個月
運(yùn)輸條件:低溫運(yùn)輸,,用干冰或者冰袋低溫運(yùn)輸。
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小鼠α1微球蛋白試劑盒 洗滌
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步驟,,但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗,。ELSIA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的,。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì),。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,,而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來??梢哉f在ELISA操作中,,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,,不得馬虎。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,過程如下:
(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液,;b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,,即甩去);c.浸泡,,即將洗滌液注滿板孔,,放置1-2分鐘,間歇搖動,,浸泡時間不可隨意縮短,;d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*,,可用水泵或真空泵抽吸,,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;e.重復(fù)操作c和d,,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定),。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間,。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法,。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,,非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),,也含親水基團(tuán),其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合,,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,,并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),,從而脫離固相載體,。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度,。
(2)流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水,。洗滌時附接一特殊裝置,,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續(xù)沖洗2分鐘后,,吸干液體,,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可,。浸泡式猶如盆浴,,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,,且也簡便,、快速。已有實(shí)驗(yàn)表明,,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌,。洗滌時設(shè)法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,,洗滌效果更佳,。
小鼠α1微球蛋白試劑盒 顯色和比色
(1) 顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng),此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物,。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素,。在一定時間內(nèi),陰性孔可保持無色,,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強(qiáng),。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進(jìn)行。在定量測定中,,加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確,。定性測定的顯色可在室溫進(jìn)行,時間一般不需要嚴(yán)格控制,,有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時間,,及時判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,,再延長反應(yīng)時間,,可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,,顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行,,顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng),。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色,。 TMB受光照的影響不大,,可在室溫中置于操作臺上,邊反應(yīng)觀察結(jié)果,。但為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性,,宜在規(guī)定的適當(dāng)時間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后,,約40分鐘顯色達(dá),,隨即逐漸減弱,至2小時后即可*消退至無色,。TMB的終止液有多種,,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長時間(12-24小時)不褪,,是目視判斷的良好終止劑,。此外,各類酸性終止液則會使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。
(2) 比色
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,,然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中,。以軟板為載體的試驗(yàn),需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中,,才可進(jìn)行比色,。在加底物液顯色前,先將軟板邊緣剪凈,,這樣,,此板就可*平妥坐入座架中。比色時應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn),,測讀底物孔(未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過程的孔),,以記錄本次試驗(yàn)的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn),,以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,,然后進(jìn)行計算。比色結(jié)果的表達(dá)以往通用光密度(oplical density,,OD),,現(xiàn)按規(guī)定用吸光度(absorbence,A),,兩者含義相同,。通常的表示方法是,,將吸收波長寫于A字母的右下角,如OPD的吸收波長為492nm,,表示方法為"A492nm"或"OD492nm",。
(3) 酶標(biāo)比色儀
酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀,通常指于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計,。針對固相載體形式的不同,,各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計,。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀,。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有:測讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性,、重復(fù)性,、精確度和可測范圍、線性等等,。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到0.001,,準(zhǔn)確性為±1%,重復(fù)性達(dá)0.5%,。舉例說,,若某孔測得的A值為1.083,則該孔相對于空氣的真實(shí)A值應(yīng)為1.083±0.01(1.073~1.093),,重復(fù)測定數(shù)次,,其A值均應(yīng)1.083±0.05(1.078~1.088)在之間。酶標(biāo)儀的可測范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同,。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000,,新型號的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900,甚至更高,。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示,。應(yīng)注意可測范圍與線性范圍的不同,線性范圍常小于可測范圍,,比如某一酶標(biāo)儀的可測范圍為0.000~2.900,,而其線性范圍僅0.000~2.000,這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時應(yīng)予注意,。 酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下,,操作時室溫宜在15~30℃,使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘,,測讀結(jié)果更穩(wěn)定,。測讀A值時,要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD用492nm波長,。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測讀,,即每孔先后測讀兩次,*次在zui適波長(W1),,第二次在不敏感波長(W2),,兩次測定間不移動ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1,,630nm為W2,,zui終測得的A值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。各種酶標(biāo)儀性能有所不同,,使用中應(yīng)詳細(xì)新聞記者說明書。