詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:小鼠β淀粉樣蛋白1-42試劑盒
英文名稱:Mouse amyloid beta peptide 1-42,Aβ1-42 ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
保存條件:2-8℃
檢測方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
產(chǎn)品用途:For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免費(fèi)代測服務(wù).
產(chǎn)品種屬齊全有:人,,小鼠,大鼠,,豚鼠,,豬,犬,,兔,,牛,羊,,猴,,兔,馬等動物種屬,。
待檢樣本:體液,,血清,血漿,,細(xì)胞培養(yǎng)上清液,,尿液,組織勻漿,心房水標(biāo)本等等,。
小鼠β淀粉樣蛋白1-42試劑盒 顯色和比色
(1) 顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng),,此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素,。在一定時間內(nèi),,陰性孔可保持無色,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強(qiáng),。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進(jìn)行,。在定量測定中,,加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確,。定性測定的顯色可在室溫進(jìn)行,,時間一般不需要嚴(yán)格控制,有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時間,,及時判斷,。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,再延長反應(yīng)時間,,可使本底值增高,。OPD底物液受光照會自行變色,顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行,,顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng),。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色,。 TMB受光照的影響不大,,可在室溫中置于操作臺上,邊反應(yīng)觀察結(jié)果,。但為保證實(shí)驗結(jié)果的穩(wěn)定性,,宜在規(guī)定的適當(dāng)時間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后,,約40分鐘顯色達(dá),,隨即逐漸減弱,至2小時后即可*消退至無色,。TMB的終止液有多種,,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長時間(12-24小時)不褪,,是目視判斷的良好終止劑,。此外,各類酸性終止液則會使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值,。
(2) 比色
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中,。以軟板為載體的試驗,,需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中,才可進(jìn)行比色,。在加底物液顯色前,,先將軟板邊緣剪凈,這樣,,此板就可*平妥坐入座架中,。比色時應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn),測讀底物孔(未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過程的孔),,以記錄本次試驗的試劑狀況,。其后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn),,以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,然后進(jìn)行計算,。比色結(jié)果的表達(dá)以往通用光密度(oplical density,,OD),現(xiàn)按規(guī)定用吸光度(absorbence,,A),,兩者含義相同。通常的表示方法是,,將吸收波長寫于A字母的右下角,,如OPD的吸收波長為492nm,表示方法為"A492nm"或"OD492nm",。
(3) 酶標(biāo)比色儀
酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀,,通常指于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計。針對固相載體形式的不同,,各有特制的適用于板,、珠和小試管的設(shè)計。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀,。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有:測讀速度,、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性,、精確度和可測范圍,、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到0.001,,準(zhǔn)確性為±1%,,重復(fù)性達(dá)0.5%。舉例說,,若某孔測得的A值為1.083,,則該孔相對于空氣的真實(shí)A值應(yīng)為1.083±0.01(1.073~1.093),重復(fù)測定數(shù)次,,其A值均應(yīng)1.083±0.05(1.078~1.088)在之間,。酶標(biāo)儀的可測范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000,,新型號的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900,,甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示,。應(yīng)注意可測范圍與線性范圍的不同,,線性范圍常小于可測范圍,比如某一酶標(biāo)儀的可測范圍為0.000~2.900,,而其線性范圍僅0.000~2.000,,這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時應(yīng)予注意,。 酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下,操作時室溫宜在15~30℃,,使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘,,測讀結(jié)果更穩(wěn)定,。測讀A值時,,要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD用492nm波長,。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測讀,,即每孔先后測讀兩次,*次在zui適波長(W1),,第二次在不敏感波長(W2),,兩次測定間不移動ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1,,630nm為W2,,zui終測得的A值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。各種酶標(biāo)儀性能有所不同,,使用中應(yīng)詳細(xì)新聞記者說明書。
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