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產(chǎn)品名稱：小鼠胰島素樣生長因子2試劑盒

英文名稱：Mouse Insulin-like growth factor 2,IGF-2 ELISA KIT

使用范圍：科研
產(chǎn)品規(guī)格：96人份/48人份
各種種屬：人,、大小鼠,、豚鼠、兔子,、豬,、犬、牛,、羊…
標本齊全：血清,、血漿、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿,、組織液、關(guān)節(jié)液,、胸腔溢液等…
經(jīng)營品牌:美國ＲＤ?。遥隆。桑拢?br />保存條件：2-8℃
有效期：６個月
運輸條件：低溫運輸,，用干冰或者冰袋低溫運輸,。

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洗滌
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步驟，但卻也決定著實驗的成敗,。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的,。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì),。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,，而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來?？梢哉f在ELISA操作中,，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)引起操作者的高度重視,，操作者應(yīng)嚴格按要求洗滌,，不得馬虎。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,，過程如下：
（1）浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液,；b.用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去）,；c.浸泡,，即將洗滌液注滿板孔，放置1-2分鐘,，間歇搖動,，浸泡時間不可隨意縮短；d.吸干孔內(nèi)液體,。吸干應(yīng)*,，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干,；e.重復(fù)操作c和d，洗滌3-4次（或按說明規(guī)定）,。在間接法中如本底較高,，可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法,。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液,。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團,，也含親水基團,，其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結(jié)合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,，并借助于親水基團和水分子的結(jié)合作用,，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體,。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時,，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度,。
（2）流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水,。洗滌時附接一特殊裝置,，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗，持續(xù)沖洗2分鐘后,，吸干液體,，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴,，流水沖洗式則好比淋浴,，其洗滌效果更為*，且也簡便,、快速,。已有實驗表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌,。洗滌時設(shè)法加大水流量或加大水壓,，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳,。

顯色和比色
（1） 顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng),，此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素,。在一定時間內(nèi),，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強,。適當提高溫度有助于加速顯色進行,。在定量測定中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確,。定性測定的顯色可在室溫進行,，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應(yīng)時間,，及時判斷,。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深，再延長反應(yīng)時間,，可使本底值增高,。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進行,，顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng),。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色,。 TMB受光照的影響不大,，可在室溫中置于操作臺上，邊反應(yīng)觀察結(jié)果,。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性,，宜在規(guī)定的適當時間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后,，約40分鐘顯色達,，隨即逐漸減弱,，至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種,，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止,。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑,。此外,，各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值,。
（2） 比色
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,，然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗,，需先將板置于標準96孔的座架中,，才可進行比色。在加底物液顯色前,，先將軟板邊緣剪凈,，這樣，此板就可*平妥坐入座架中,。比色時應(yīng)先以蒸餾水校零點,，測讀底物孔（未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔），以記錄本次試驗的試劑狀況,。其后可用空白孔以蒸餾水校零點，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,，然后進行計算,。比色結(jié)果的表達以往通用光密度（oplical density，OD）,，現(xiàn)按規(guī)定用吸光度（absorbence,，A），兩者含義相同,。通常的表示方法是,，將吸收波長寫于A字母的右下角，如OPD的吸收波長為492nm,，表示方法為"A492nm"或"OD492nm",。
（3） 酶標比色儀
酶標比色儀簡稱酶標儀，通常指于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計,。針對固相載體形式的不同,，各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計,。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標儀,。酶標儀的主要性能指標有：測讀速度、讀數(shù)的準確性、重復(fù)性,、精確度和可測范圍,、線性等等。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可精確到0.001,，準確性為±1%,，重復(fù)性達0.5%。舉例說,，若某孔測得的A值為1.083,，則該孔相對于空氣的真實A值應(yīng)為1.083±0.01（1.073~1.093）,，重復(fù)測定數(shù)次,，其A值均應(yīng)1.083±0.05（1.078~1.088）在之間。酶標儀的可測范圍視各酶標儀的性能而不同,。普通的酶標儀在0.000~2.000,，新型號的酶標儀上限拓寬達2.900,，甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示,。應(yīng)注意可測范圍與線性范圍的不同,，線性范圍常小于可測范圍，比如某一酶標儀的可測范圍為0.000~2.900,，而其線性范圍僅0.000~2.000,，這在定量ELISA中制作標準曲線時應(yīng)予注意。 酶標儀不應(yīng)安置在陽光或強光照射下,，操作時室溫宜在15~30℃,，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定,。測讀A值時,，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波長,。有的酶標儀可用雙波長式測讀,，即每孔先后測讀兩次，*次在zui適波長（W1）,，第二次在不敏感波長（W2）,，兩次測定間不移動ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1,，630nm為W2,，zui終測得的A值為兩者之差（W1-W2）。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。各種酶標儀性能有所不同,，使用中應(yīng)詳細新聞記者說明書,。

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