詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:人心肌肌凝蛋白輕鏈1試劑盒
英文名稱:Human Cardiac myosin-light chains 1,CMLC-1 ELISA KIT
種屬:人
使用范圍:科研
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
各種種屬:人,、大小鼠,、豚鼠、兔子,、豬、犬,、牛,、羊…
標(biāo)本齊全:血清、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿、組織液,、關(guān)節(jié)液,、胸腔溢液等…
經(jīng)營品牌:美國RD RB?。桑拢?br />保存條件:2-8℃
有效期:6個(gè)月
運(yùn)輸條件:低溫運(yùn)輸,,用干冰或者冰袋低溫運(yùn)輸。
人心肌肌凝蛋白輕鏈1試劑盒保溫
在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),,即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后,。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,,這一保溫過程稱為溫育(incubation),,有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當(dāng),。ELISA屬固相免疫測定,,抗原,、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,,加入板孔中的標(biāo)本,,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會,只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,。這是一個(gè)逐步平衡的過程,,因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此,。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時(shí)間的溫育,。溫育常采用的溫度有43℃、37℃,、室溫和4℃(冰箱溫度)等,。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度,。在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時(shí),,實(shí)驗(yàn)表明,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí),,產(chǎn)物的生成可達(dá),。為加速反應(yīng),可提高反應(yīng)的溫度,,有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行,,但不宜采用更高的溫度??乖贵w反應(yīng)4℃更為*,,在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜,以形成zui多的沉淀,。但因所需時(shí)間太長,,在ELISA中一般不予采用。保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,,一般均采用水浴,,可將ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底應(yīng)貼著水面,,使溫度迅速平衡,。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,,此時(shí)可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱,,ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi),,濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,,在盒底墊濕的紗布,zui后將ELISA板放在濕紗布上,。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度,,特別是在氣溫較低的時(shí)候更應(yīng)如此。無論是水浴還是濕盒溫育,,反應(yīng)板均不宜疊放,,以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應(yīng),,操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),,標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時(shí)可根據(jù)說明書的要求控制溫育,。室溫溫育時(shí),,ELISA板只要平置于操作臺上即可。應(yīng)注意溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確,。為保證這一點(diǎn),,一個(gè)人操作時(shí),一次不宜多于兩塊板同時(shí)測定,。
洗滌
洗滌在ELISA過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,,但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的,。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),,以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,,而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來??梢哉f在ELISA操作中,,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,,不得馬虎。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,,過程如下:
(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,,即甩去),;c.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,,放置1-2分鐘,,間歇搖動,,浸泡時(shí)間不可隨意縮短;d.吸干孔內(nèi)液體,。吸干應(yīng)*,,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干,;e.重復(fù)操作c和d,,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定)。在間接法中如本底較高,,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時(shí)間,。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液,。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,,非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),也含親水基團(tuán),,其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合,,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),,從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,,其濃度可在0.05%-0.2%之間,,高于0.2%時(shí),可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度,。
(2)流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置,,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,,持續(xù)沖洗2分鐘后,吸干液體,,再用蒸餾水浸泡2分鐘,,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,,流水沖洗式則好比淋浴,,其洗滌效果更為*,且也簡便,、快速,。已有實(shí)驗(yàn)表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓,,讓水流沖擊板孔表面,,洗滌效果更佳。
注:本產(chǎn)品僅供科研使用,,不提供臨床,,了解詳情請:,