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產(chǎn)品名稱：人一氧化氮合成酶試劑盒
英文名稱：Human nitric oxide synthase,NOS ELISA KIT
種屬：人
使用范圍：科研
產(chǎn)品規(guī)格：96人份/48人份
各種種屬：人、大小鼠,、豚鼠,、兔子、豬,、犬,、牛、羊…
標(biāo)本齊全：血清,、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿,、組織液,、關(guān)節(jié)液、胸腔溢液等…
經(jīng)營(yíng)品牌:ＲＤ,、ＲＢ,、ＩＢＬ
保存條件：2-8℃
有效期：６個(gè)月
運(yùn)輸條件：低溫運(yùn)輸，用干冰或者冰袋低溫運(yùn)輸,。
  ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定（ Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ）的簡(jiǎn)稱,。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問(wèn)世以來(lái),，發(fā)展十分迅速,，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。 　　
實(shí)驗(yàn)原理
　　ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),，將抗原,、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原,、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性,。在實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì),，具體的方法步驟可有多種,。即:用于檢測(cè)抗體的間接法（圖a）、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等,。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法,。
操作步驟
     方法一　用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:
　　1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml,。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過(guò)夜,。次日,，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘,。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）,。
　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌,。（同時(shí)做空白孔,，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）。
　　3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃孵育0.5～1小時(shí),，洗滌,。
　　4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘,。
　　5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”,、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O•D值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O•D值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性。
　　方法二　用于檢測(cè)未知抗體的間接法：　　　
1,、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml,，每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜,。
2,、次日洗滌3次,。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。同時(shí)做空白,、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,zui后一遍用DDW（超純水）洗滌,。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5,、6,。
3.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘,。
4.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
5.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”,、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O•D值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O•D值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性。