人幽門螺桿菌抗體IgG(HP IgG)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書

 本試劑盒僅供研究使用,。

  規(guī)格：96T

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中幽門螺桿菌抗體 IgG(HP IgG)表達(dá),。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中人幽門螺桿菌抗體 IgG(HP IgG)表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板,，制成固相抗原,，可與樣品中幽門螺桿菌抗體 IgG(HP IgG)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合,，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,， 經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較,， 從而判定標(biāo)本中幽門螺桿菌抗體 IgG(HP IgG)的存在與否,。

試劑盒組成

標(biāo)本要求

1. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2. 不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟

1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔,、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1

孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）

• 加樣：分別在陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50µl,。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液 40µl,，然后再加待測(cè)樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻，
• 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
• 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此重復(fù) 5 次，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3,。

8. 洗滌：操作同 5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

人幽門螺桿菌抗體IgG(HP IgG)酶聯(lián)免疫分析計(jì)算和結(jié)果判定：

試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10 臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為幽門螺桿菌抗體 IgG(HP IgG)陰性陽(yáng)性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為幽門螺桿菌抗體 IgG(HP IgG)陽(yáng)性

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注意事項(xiàng)

1. 操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

2. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

3. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

4. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

5. 底物請(qǐng)避光保存,。

6. 試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),，參考波長(zhǎng)為 630nm

7. 所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,，使用時(shí)必須注意安全,。

保存條件及有效期

1. 試劑盒保存：；2-8℃,。

2. 有效期：6 個(gè)月