l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿、組織,、細胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠白細胞介素27（IL-27）的含量,。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被大鼠白細胞介素27（IL-27）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標本、標準品,、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的大鼠白細胞介素27（IL-27）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度。

樣品收集,、處理及保存：

1）細胞培養(yǎng)上清：

適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份,。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。

2）細胞：

用PBS反復洗滌細胞3次，調(diào)整細胞濃度達到104-106/ml 左右,，通過反復凍融,，使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份，或者細胞超聲粉碎,，離心取上清液檢測,。

3）血清：

在室溫下，血液自然凝固,，以1000×g離心15分鐘,，取上清待測。

4）血漿：

應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合后靜置10-20 分鐘后,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。

5）體液：

包括胸腹水,、腦脊液，分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。

6.）組織標本：

切取組織標本,，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS,，用手工或勻漿器,，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘,，收集上清進行檢測,。

樣品中不能含有NaN3,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

7）保存：

   如果樣品不能立即檢測,，應(yīng)將其分裝,，-70 ℃保存，避免反復冷凍,。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中含大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

IL-27,BIM大鼠白細胞介素27酶聯(lián)免疫試劑盒代測操作步驟：

1）取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘,。

2）分組：取出96孔板,，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理,。分別設(shè)標準品組（6個濃度）,、空白孔、待測樣品組,。

3）標準品的稀釋：準備小試管6 只,，依次編好號碼，先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul,，然后取原濃度標準品100ul加入一只已編好號的試管中,，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第三只試管中,，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第五只試管中，充分混勻,；然后在該試管中取100ul,，棄掉。第六只試管作為0 號標準品,。

注：為減少實驗誤差,，保證準確性，建議設(shè)置復孔。

4）加樣：依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中,；空白對照孔加入50ul的蒸餾水,；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。

5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。

6）洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒棄去，如此重復5 次,，拍干。

7）加酶標溶液：標準品組,、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液（空白對照孔除外）,。

8）溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時,。

9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔,，靜置15-30s，充分清洗酶標板5次,，用吸水紙*拍干,。

10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul,。

11）終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,，加入50ul終止液。

12）讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值,。

注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,，讀板時間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)，以免影響準確性,。

IL-27,BIM大鼠白細胞介素27酶聯(lián)免疫試劑盒代測數(shù)據(jù)計算：

  以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，即為樣品的實際濃度。

注意事項：

1）實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染,。

2）加樣：加樣時,，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔間的時間間隔過大,，否則將會導致不同的預孵育時間,，從而影響實驗的準確性以及重復性。

3）孵育：嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行,。

反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化,，如果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),。

4）建議實驗前預測樣品含量,，如樣品濃度過高，應(yīng)對樣品進行稀釋,，計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

5）建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線，試用幾個標本）,，如果對本試劑盒有任何疑問,，可和所購經(jīng)銷商，如果因運輸過程導致試劑盒失效,，可要求調(diào)換,，但概不承擔產(chǎn)品本身以外的任何損失。