BIM試劑盒,小鼠WNT1可誘導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑蛋白1（WISP1）ELISA試劑盒

  源自*酶聯(lián)免疫技術(shù)我司,，涵蓋國內(nèi)外專家的經(jīng)驗(yàn)與智慧,。采用精良的技術(shù)和設(shè)備，確保品質(zhì)的同時,，降低成本,，為更多有需要的研究人員，節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi),，保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,，為國家的科技發(fā)展多做貢獻(xiàn)。多家生物科研基地合作伙伴,，實(shí)力團(tuán)隊(duì)傾力打造專注于ELISA試劑盒的生產(chǎn),，研發(fā)，助力您的科研試驗(yàn),！

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿、組織,、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠WNT1可誘導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑蛋白1（WISP1）的含量,。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被小鼠WNT1可誘導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑蛋白1（WISP1）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的小鼠WNT1可誘導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑蛋白1（WISP1）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。

樣本處理及要求

1.  血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2.  血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3.  組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果）,，稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,，或反復(fù)凍融,。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測,。

4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
注：標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測,。

標(biāo)本處理

1.  本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé),，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,，預(yù)留充足的樣本,。

2.  實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量，如果標(biāo)本濃度過高,，應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋,，使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2),。

3.  若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性,，并注意留存樣本,。

4.  使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

5.  若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,，因該類樣本干擾因素較多,，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量,、采樣時間等,，所以可能存在檢測不出的情況,。

6.  某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白,，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,，而不被檢測出。

7.  建議使用新鮮樣本,，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差,。

需要而未提供的試劑和器材

• 酶標(biāo)儀（450nm）
• 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL
• 37℃恒溫箱
• 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

備注：

1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：400、200,、100,、50、25,、0 pg/mL

2.  經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可,。當(dāng)有部分樣本值超過zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)

• 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑。
• 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
• 消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值,。
• 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用,。
• 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
• 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射,。
• 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。
• 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性,。
• 不能使用過期產(chǎn)品,。
• 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。

試劑準(zhǔn)備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；

3.  樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加,。

4.  除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計算

以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程,，將樣品的OD值代入方程,，計算出樣品的濃度。

試劑盒性能

1.  檢測范圍：12.5 pg/mL – 400 pg/mL,。

2.  靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0 pg/mL,。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,，板間變異系數(shù)小于15% ,。

說明

1.  由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。

2.  zui終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性,、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),，請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。

3.  不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,，如：檢測限,、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,，電子版說明書僅作參考,。

4.  只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他商的產(chǎn)品,。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說明才會得到的檢測結(jié)果,。

問題解答

若實(shí)驗(yàn)效果不好，請及時對顯色結(jié)果拍照,，保留所用板條及未使用試劑,，并妥善保存，然后我公司為您解決問題,。同時您也可以參考以下資料：

訂購說明：

1,、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨,。

2,、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂,，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂,。

3、部分產(chǎn)品價格會因貨期,、批次等因素發(fā)生變化,，若有變動以訂貨當(dāng)日價格為準(zhǔn)。

4,、每日訂單截止時間為16點(diǎn)整,，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨,。

5,、請辦理完貨款后，將收據(jù),、底單等連同收貨人的地址,、姓名、等以傳真,、,、等形式通知我們。

    咨詢訂購產(chǎn)品,，您也可以我公司業(yè)務(wù)員的,，或者本中留言（會在半個工作日內(nèi)給您回復(fù)去）