實驗技術(shù)簡介:多肽合成是一個固相合成順序一 般從C端 (羧基端)向N端(氨基端)合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法,。從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來,經(jīng)過不斷的改進和完善,，到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個常用技術(shù)，表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法*的優(yōu)點,，從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度,。多肽合成總的來說分成兩種:固相合成和液相多肽合成。

實驗技術(shù)原理:

多肽合成儀以固相合成為反應(yīng)原理,，在密閉的防爆玻璃反應(yīng)器中使氨基酸按照已知順序(序列,，一般從C端-羧基端向N端-氨基端)不斷添加,、反應(yīng)、合成,，操作終得到多肽載體,。固相合成法，大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度,。為了防止副反應(yīng)的發(fā)生,，參加反應(yīng)的氨基酸的側(cè)鏈都是保護的。羧基端是游離的,，并且在反應(yīng)之前必須活化,。

實驗操作流程:

1、去保護: Fmoc保護的柱子和單體必須用-種堿性溶劑(piperidine) 去除氨基的保護基團,。

2,、激活和交聯(lián):下一個氨基酸的羧基被一種活化劑所活化。 活化的單體與游離的氨基反應(yīng)交聯(lián),，形成肽

鍵,。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅(qū)使反應(yīng)完成。循環(huán):這兩步反應(yīng)反復(fù)循環(huán)直到合成完成,。

3,、洗脫和脫保護:多肽從柱上洗脫下來，其保護基團被一種脫保護劑 (TFA)洗脫和脫保護,。

多肽修飾類型:

1,、C端標(biāo)記技術(shù):

C端酰胺化(Amidation,C-termainal)

醛基化(Aldehydes) 、醇基化(Alcohols) ,、pNA (P-Nitroanilide)

AMC,、AFC、巰基乙胺化(Cysteamide) ,、酯基化(Ester) ,、N-烷基化(N-AlkyI Amides)等

2、N端標(biāo)記技術(shù):

乙?；疉cetylated (Acetylated) ,、Palmytolyl、 HYNIC,、 生物素標(biāo)記(Biotinylated),、 Br乙酰化(Bromoacetylated)

螯合反應(yīng)(DOTA, DTPA conjugated),、甲醛化(Formylated),、十四烷基,、 十八烷基化(Myristoylated)琥珀?；?、棕櫚酸化、蘋果酸化,、脂肪酸化等(Succinylated)

3,、熒光標(biāo)記修飾:

C端修飾: AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye), pNA, Rh110

N端修飾: Bodipy-FL, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-odoacetamido fluoresceinRhodamine 110 and Rhodamine B Luciferin, EDANS

FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamine 101, 5-TAMRA

4、環(huán)化反應(yīng):

首尾成環(huán),，中間成環(huán),，特殊成環(huán)(N -> C or Head to Tail)

2對二_硫鍵，3對二 硫鍵(Disulfide (S-S bond formation) .Triulide formation)天然產(chǎn)物活性肽成環(huán)(Cyclic-natural peptides )

5,、甲基化修飾:

側(cè)鏈甲基化Lys(For),LysS(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)N端甲基化(N-Me Arg,N-Me-Asp, N-Me-Glu, N-Me-Leu, N-Me-Nle, N-Me-Nva, N-Me-Phe, N-Me-S N-

Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val)

6,、幾種特殊修飾:

各種偶聯(lián)(BSA, KL H conjugated peptides for antibody production )、磷酸化 (Phosphoserine,Phosphothreonine, Phosphotyrosine),、磺化 (Sulfated Tyrosine or Serine),、MAPS (MultipleAntigenic Peptide)、糖肽(Glycopeptides)PEG修飾(PEGylation)

實驗注意事項:

客戶提供:

1,、多肽序列,、數(shù)量、純度及特殊要求

2,、凍干多肽可在-20度保存或室溫保存

3,、溶液肽遠(yuǎn)比凍干形式不穩(wěn)定,溶液應(yīng)為中性PH (5-7) -20度保存。

4,、為避免樣品的反復(fù)凍融,，hao分成小樣存放,。

交付標(biāo)準(zhǔn):

臺成多肽,、數(shù)據(jù).

其他:

大多數(shù)多肽的首xuan溶劑是超純抽氣水,，稀Z酸或氨水分別對堿性或酸性多肽的溶解也有幫助,。如果這些方法用過后還不溶解的多肽,，建議用DMF,脲,，guanidiniam,chloride ,acetonitnle來溶解

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