同位素標(biāo)記定量:

iTRAQ (isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation) &TMT (Tandem Mass Tags)分別由AB Sciex公司和Thermo公司研發(fā)的多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)，利用多種同位素試劑標(biāo)記蛋白多肽N末端或者賴氨酸側(cè)鏈基團(tuán),，不同分子量的試劑對不同來源的樣品進(jìn)行標(biāo)記從而實(shí)現(xiàn)不同樣品間蛋白質(zhì)組的比較,。

iTRAQ實(shí)驗(yàn)步驟:

1.樣品準(zhǔn)備:將待測樣品進(jìn)行定量計(jì)算出樣品蛋白濃度;

2.蛋白還原烷基化及酶解:每組樣品各取100μg按照iTRAQ試劑盒要求進(jìn)行處理,，使用測序級胰蛋白酶溶液酶解后,超濾管離心收集酶解肽段;

3. iTRAQ標(biāo)記:將ITRAQ試劑平衡到室溫,用150μL異丙醇溶解,，取酶解肽段加入iTRAQ試劑后室溫反應(yīng)2 h,加入水終止反應(yīng),，等量混合不同組樣品,，真空冷凍干燥樣品: .

4. LC-MS-MS分析:使用Thermo的Q-Exactive Orbitrap進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜鑒定。

5.數(shù)據(jù)處理及生信分析

結(jié)果展示：

                                                                                  全局分析聚類熱圖

                                     *0的蛋白數(shù)目統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1.實(shí)驗(yàn)周期: 4-6周

2.交付標(biāo)準(zhǔn):蛋白定量結(jié)果、鑒定結(jié)果,、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù),、生信分析結(jié)果(G0分析. KEGG分析等等)

需確認(rèn)的信息

1.樣本的種屬

2.樣本的類型(組織or細(xì)胞or血液)

3.樣本的數(shù)量及分組

4.分析要求

參考文獻(xiàn)

[1]XuX，Zhu Q,，Zhang R,，et al. ITRAQ-Based Proteomics Analysis of Acute Lung Injury Induced by Oleic Acid in

Mice[J]. Cellular Physiology and Biochemistry, 2017:1949-1964.

[2]QuZ, GaoF , LiL, et al. Label-Free Quatitative Proteomic Analysis of Diferentially Expressed Membrane Proteins

of Pulmonary Alveolar Macrophages Infected with Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome

Virus and Its Attenuated Strain[J]. PROTEOMICS, 2017:1700101.

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