氯丙嗪

（組合V型）

快速檢測試劑盒說明書

一,、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,，樣本中的殘留物氯丙嗪將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭氯丙嗪酶標(biāo)記抗體,，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物氯丙嗪的含量成負(fù)相關(guān),，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物氯丙嗪的含量,。

二、試劑盒特性

u 產(chǎn)品貨號：   YJ62A\J4

u 靈 敏 度：   0.2ppb

u 孵育溫度：   25℃

u 孵育時(shí)間：   30min~15min

u 樣本檢測下限

組織   ·············································· 0.5ppb 

u 交叉反應(yīng)率

氯丙嗪·············································   100%

u 樣本回收率

組   織   ·································   90%±30%

三,、試劑盒組成

四、所用儀器,、試劑

具備的儀器：酶標(biāo)儀,、恒溫箱

微量移液器：單道 20~200µl、單道100~1000µl,、多道 30~300 µl

五,、樣本前處理步驟

詳見組合V型樣本前處理說明書。

六,、 酶標(biāo)免疫分析程序:

u 測定前應(yīng)須知：

1,、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。

2,、 使用之后立即將所有試劑放回2～8℃,。

3、 在ELISA分析中的再現(xiàn)性,，很大程度上取決于洗板的一致性,，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。

4,、 所有恒溫孵育過程,，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。

u 操作步驟：

1,、 從2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,，室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻,。

2,、 取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋,，保存于2-8℃,。

3,、 配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水）,，或按所需用量配制洗滌液。

4,、 編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置,。

5,、 配液：將0.7ml11X酶濃縮液（11倍濃縮）用酶標(biāo)記物稀釋液按照1：10稀釋（1份11X酶濃縮液+10份酶標(biāo)記物稀釋液）。

6,、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50µl/孔到各自的微孔中,，加入配制好的酶標(biāo)記物50µl/孔，用蓋板膜封板,，25℃環(huán)境中反應(yīng)30min,。

7、 將孔內(nèi)液體甩干,，用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板4～5次，每次間隔15～30秒,，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）,。

8、 顯色：加入底物A液50µl/孔,，再加入底物B液50µl/孔,，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min,。

9,、 測定：加入終止液50µl/孔，輕輕振蕩混勻,，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測,，5min內(nèi)讀數(shù)），測定每孔OD值,。

七,、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,，粗略判定可用第1種方法,，定量判定用第2種方法,。注意樣本吸光度值與其所含氯丙嗪量成負(fù)相關(guān),。

1,、粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,，樣本2的吸光度值為1.0,，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.2ppb為1.816,；0.6ppb為1.415,；1.8ppb為0.74,；5.4ppb為0.313,；16.2ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是5.4ppb～16.2ppb,；樣本2的濃度范圍是0.6ppb～1.8ppb,，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯丙嗪實(shí)際濃度。

2,、定量分析

（1）百分吸光率的計(jì)算,，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%,，即

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B₀—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),，以氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯丙嗪實(shí)際濃度,。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析,。（歡迎來電索?。?/span>

八,、 注意事項(xiàng)

1、 室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫（20～25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低,。

2,、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,，重復(fù)性不好的現(xiàn)象,。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3,、 混合要均勻,，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4,、 反應(yīng)終止液為2M硫酸,，避免接觸皮膚。

5,、 不要使用過了有效日期的試劑盒,；稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度,、OD值變化,；不要交換使用不同批號的盒中試劑。

6,、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封,；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下,。

7,、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之,。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時(shí),，表示試劑可能變質(zhì)。

8,、 該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃,，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九,、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

1,、 儲(chǔ)藏條件：試劑盒于2～8℃保存，不要冷凍,。

2,、 保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒,。

提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,，酶標(biāo)板仍然正常有效,，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請放心使用,。

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