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間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化試劑盒
,成軟骨誘導(dǎo)液
貨號:YJ-MSCYD-003
價格: 2880.0
規(guī)格: 200ml
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品為團(tuán)隊精心優(yōu)化的間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化試劑盒,,可增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞向成軟骨細(xì)胞分化的能力。
本產(chǎn)品僅用于科研用途,,不可用于診斷,、治療、臨床,、家庭及其他用途,。
產(chǎn)品組成成分及保存
試劑名稱 | 體積 | 保存條件 | 有效期 |
地塞米松 | 20μL | -20℃ | 1 Year |
脯氨酸 | 200μL | -20℃ | 1 Year |
抗壞血酸 | 600μL | -20℃ | 1 Year |
TGF-β1 | 2mL | -20℃ | 1 Year |
丙酮酸鈉 | 2mL | -20℃ | 1 Year |
ITS 添加物 | 2mL | -20℃ | 1 Year |
雙抗 | 2mL | -20℃ | 1 Year |
胎牛血清 | 20mL | -20℃ | 1 Year |
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 200mL | 2-8℃ | 1 Year |
甲苯胺藍(lán)染色液 | 5mL | RT(室溫) | 1 Year |
注意:
1.為保證產(chǎn)品的有效性,請避免反復(fù)凍融,。
2.現(xiàn)用現(xiàn)配,,配制好的預(yù)混液保存于2-8℃,有效期1 month;配制好的完全培養(yǎng)基保存于2-8℃,,有效期12 hours.
產(chǎn)品使用說明
1. 成軟骨誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基的配制
①室溫條件下融化各因子及血清,。各因子融化后,瞬時離心,,使溶液集中于離心管底部,。
(注意:若因子或血清中有沉淀物,屬正?,F(xiàn)象,,無須過濾,避免成分丟失,。)
②根據(jù)實驗用量,,于無菌操作臺中配制誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基,,建議每次配制50mL,配制比例見下表:
試劑成分 | 配制比例 | 50mL配制體系 |
地塞米松 | 0.01% | 5μL |
脯氨酸 | 0.1% | 50μL |
抗壞血酸 | 0.3% | 150μL |
TGF-β1 | 1% | 500μL |
丙酮酸鈉 | 1% | 500μL |
ITS 添加物 | 1% | 500μL |
雙抗 | 1% | 500μL |
胎牛血清 | 10% | 5mL |
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 補(bǔ)充至所需體積 | 補(bǔ)充至總體積為50mL |
2. 成軟骨誘導(dǎo)分化實驗步驟
①建議取第3~5代,、純度達(dá)90%以上,、狀態(tài)良好的間充質(zhì)干細(xì)胞,將其消化下來,,離心收集,,使用間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度為1~5×105個cell/mL,均勻鋪于6孔板中,,每孔2mL,,置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
(注意:此處細(xì)胞密度及培養(yǎng)液體積以6孔板為例,,若為其它培養(yǎng)器皿,,請根據(jù)實際情況調(diào)整細(xì)胞密度及培養(yǎng)液體積。)
②待細(xì)胞匯合度達(dá)80%~100%時,,即可進(jìn)行誘導(dǎo)分化,。
③小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清,沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基,,每孔2mL,,置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
(注意:完全培養(yǎng)基加入細(xì)胞前需提前置于37℃預(yù)熱,。)
③每2day換用新鮮的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基。換液時,,若細(xì)胞培養(yǎng)上清顏色變?yōu)槌吻宓狞S色,,是由于細(xì)胞量較大,培養(yǎng)基消耗較快導(dǎo)致的,,請及時調(diào)整為每日換液,。
(注意:完全培養(yǎng)基加入前需提前置于37℃預(yù)熱。)
④細(xì)胞誘導(dǎo)3周后,,即可進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色鑒定,。
3. 甲苯胺藍(lán)染色分析
①細(xì)胞誘導(dǎo)分化結(jié)束后,小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清,,1×PBS潤洗1~2次,。每孔加入1mL細(xì)胞固定液(4%中性甲醛溶液等),室溫固定30 min,。
②吸棄細(xì)胞固定液,,1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入甲苯胺藍(lán)染色液,,每孔1mL,,室溫染色30min,。
(注意:染色液底部可能會有沉淀,吸取時盡量不要觸及底部,。若染色后有沉淀,,1×PBS洗去即可。)
③吸出染色液,,1×PBS潤洗,,去掉浮色。顯微鏡下觀察細(xì)胞染色效果,,背景呈淡藍(lán)色,,成軟骨細(xì)胞呈紫紅色。
(注意:染色液可重復(fù)使用,,建議收集,。)
質(zhì)量控制
無菌檢測(細(xì)菌、真菌和支原體檢測)
pH測試
滲透壓檢測
內(nèi)毒素
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注意事項
僅限科研用。
培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì),,請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,;這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,如有接觸,,立即用自來水沖洗即可,。
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