大鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液試劑盒

貨號：YJ-P8630

價格： 1080.0

規(guī)格： 200ml

產(chǎn)品介紹

本分離液為Ficoll、羥乙基淀粉550與泛影酸葡甲胺的混合液,?？鼓庵苎稍诜蛛x液中分層。離心時,，在Ficoll,、羥乙基淀粉的作用下紅細(xì)胞與粒細(xì)胞聚集并迅速沉降；此時,，淋巴細(xì)胞及其他單個核細(xì)胞仍處于分離液上層,，紅細(xì)胞污染可忽略不計。大部分血小板可在細(xì)胞清洗低速離心過程中去除,。 其他人及動物多種比重細(xì)胞分離液,，因不同種屬不同比重分離液的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重,、動物種屬及被分離細(xì)胞的名稱,。

適用于從動物抗凝血液中分離淋巴細(xì)胞，無菌條件下所分離的淋巴細(xì)胞可用于細(xì)胞培養(yǎng)等,。本品僅供科研使用,。

密度：1.0830±0.0001g/ml

本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作,。無菌條件下操作,，啟封后置常溫保存。如 4℃保存,，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,，影響分離效果。

產(chǎn)品內(nèi)容：

各種動物外周血淋巴細(xì)胞分離液 200mL

全血及組織稀釋液 200mL

細(xì)胞洗滌液 200mL

保存：18℃-25℃保存,，有效期兩年。本品易感染細(xì)菌,，需無菌條件下操作,。無菌條件下操作，啟封后常溫保存,。如4℃保存,，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果,。

操作步驟：

1. 取新鮮抗凝全血（EDTA,、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液,，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。

2. 在離心管中加入適量分離液（當(dāng)稀釋后血液體積小于3mL時,，加入3mL分離液,；大于等于3mL，加入等體積分離液,。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二,，否則會影響分離效果），將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,，注意保持兩液面界面清晰,。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上,，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多加樣時間較長,，在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正?，F(xiàn)象。）

3. 室溫,，水平轉(zhuǎn)子500~1000g,，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時間越長,，最佳的分離條件需摸索,，離心轉(zhuǎn)速最大不超過1200g）。

4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：最上層是稀釋的血漿層,，中間是透明的分離液層,，血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細(xì)胞層，離心管底部是紅細(xì)胞與粒細(xì)胞,。

5. 小心的吸取白膜層細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中,， 10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞。250g,，離心10min,。

6. 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞,，250g,，離心10min。

7. 重復(fù)步驟6

8. 棄上清,，細(xì)胞重懸備用,。

注意事項(xiàng)：

A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品,，為延長分離液保存時間,，請在無菌條件下啟封,，避免微生物污染。,。

B. 分離液使用時應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃）,，如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱,。4℃或者是溫度較低的條件下離心,，可能會導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。

C. 血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)）,，為保持淋巴細(xì)胞的活性,，應(yīng)避免冷凍和冷藏。

D. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞,，不可使用含Ca,、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導(dǎo)致血細(xì)胞凝集,，大大降低細(xì)胞得率及純度,。

E. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導(dǎo)致細(xì)胞掛壁,，影響分離效果,。

F. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果,，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間,，摸索最佳的分離條件。

G. 吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加,；吸取過多的血漿層可能會導(dǎo)致淋巴細(xì)胞中血漿蛋白及血小板污染,。

H. 如果要進(jìn)一步對分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，那在收集血液和分離過程中,，注意無菌操作,，避免微生物污染。

I. 不同動物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同,，用戶在制定分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重,、動物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。

注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用,。請勿用于醫(yī)藥,、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途,。請勿存放于普通住宅區(qū)。

2. 為了您的安全和健康,，請穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作,。

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