RAW264.7+GFP小鼠單核巨噬細胞白血病細胞綠色熒光標記

,RAW264.7 GFP

貨號：YJ-0082a

價格： 3200.0

規(guī)格： 1*10 ⁶

細胞描述

此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤,。sIg-, Ia-抗原,、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒,，XC斑點形成試驗陰性,。可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖,?？梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用,。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶GFP基因,。

細胞特性

1） 來源：鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞,；巨噬細胞

2） 形態(tài)：不規(guī)則圓形,，紡錘狀,，貼壁細胞，少量懸浮,。

3） 含量：>1x106  細胞數

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用,。

細胞篩選

該細胞為穩(wěn)定轉染GFP的細胞，隨細胞傳代次數的增加,，其GFP熒光強度會逐漸減弱,。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選,。

建議收到細胞后至少傳3代,，凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時,，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,，以此類推,，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,，漂浮細胞大于60%,，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),，至細胞密度約80%,，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,，可停止篩選,，用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯系我們,。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據,。

3）半貼細胞或貼壁不牢（懸?。┘毎?/span>T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況,，若細胞密度在60%以下,，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收,。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

1） 準備DMEM(包含2mM L-谷氨酰胺,，0.11g / L丙酮酸鈉) (推薦YJ-0001)培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清10 %,；P/S青霉素-鏈霉素 1%,。

2） 注意事項：

（a）在細胞生長的初始階段，細胞以貼壁的形式生長并呈現出長方體的形態(tài)和有“偽足"延伸,。隨著培養(yǎng)時間的增加,，細胞呈現圓形并以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度,，會有細胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中,，鏡下觀察會發(fā)現懸浮和貼壁的細胞會同時出現。

（b）該細胞傳代時不需要用胰酶消化,。傳代時,，用無菌細胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中,。（c）該細胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形,。當細胞密度較大時，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起,，有些細胞甚至脫落漂浮,。這些漂浮的細胞是存活的，在傳代時應收集起來,，離心后細胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng),。

（d）血清質量差異可能引起細胞貼壁能力變化，應選用高質量的胎牛血清,。

3） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

4） 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理

1）凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，完全培養(yǎng)基重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞,，傳代可以參考以下方法：

該細胞用細胞刮鏟替代胰酶來對細胞進行處理,。用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養(yǎng)表面將細胞刮落，收集細胞后離心去上清,，重懸后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶內,。收貨后第一次傳代1:2進行，后續(xù)可以根據實際的情況以1:2~1:4的比例進行傳代,。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。

從2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫(yī)學實驗技術及論文潤色服務,，協(xié)助客戶各類實驗服務及論文潤色十余年,，是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,，歡迎您與我們聯系,。

實驗技術服務：