小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（G422）培養(yǎng)說明書

時間：2018/8/14閱讀：1764

小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 (G422)

貨號：MNCL-011

細(xì)胞介紹

1964年建株；甲基膽蒽植入Km小鼠腦內(nèi)誘發(fā)星形細(xì)胞瘤,，傳至第120代后轉(zhuǎn)為膠質(zhì)細(xì)胞瘤；瘤細(xì)胞懸液同系小鼠皮下,、肌肉,、腦內(nèi)移植，成功率皆100%,。肌肉及腦內(nèi)移植可形成較規(guī)律的移植性瘤株,，存活時間腦內(nèi)型15.9±4.8天；肌肉型20.3±6.6天,。

細(xì)胞特性

1） 來源：星形細(xì)胞瘤

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣,，貼壁生長

3） 含量：>1x10⁶個/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

細(xì)胞接受后的處理：

1）收到細(xì)胞后,，請檢查是否漏液，如果漏液,，請拍照片發(fā)給我們,。

2）請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

4）如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代,，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基,。

5）接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程,，供參考

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO,，貨號11995-065),，90%；胎牛血清,，10%,。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%,。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3）凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。

二． 細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化,。

3. 輕輕吹打后吸出,，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,，先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計數(shù),。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行，后的重懸液使用血清,。懸浮細(xì)胞直接計數(shù)后離心,，用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X10⁶個細(xì)胞凍存。