小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞(BV2)

貨號：MNCL-002

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞來源于德國DSMZ（German collection of microorganisms and cell cultures）,，采集于小鼠腦小膠質(zhì)細(xì)胞瘤。

細(xì)胞特性

1） 來源：小鼠腦

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣,，貼壁生長

3） 含量：>1x10⁶ 個/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞,。收到細(xì)胞后，可在1000RPM,，常溫條件下,，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清,，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，傳代達到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM,，GIBCO,，貨號11965-092)，90%,；胎牛血清,，10%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,。

3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細(xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存,。

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系,。

2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

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