小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞

(bEnd.3)

貨號：MNCL-009

細(xì)胞介紹

細(xì)胞轉(zhuǎn)染了表達(dá)多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,。

細(xì)胞特性

1） 來源：BALB/c小鼠腦

2） 形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

3） 含量：>1x10⁶ 個/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞,。收到細(xì)胞后,，可在1000RPM,，常溫條件下，離心5min后,，于潔凈操作臺棄去上清,，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM,，GIBCO，貨號11965-092),，90%,；胎牛血清，10%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細(xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

人甲狀腺癌細(xì)胞（B-CPAP）培養(yǎng)說明書           DC2.4小鼠樹突狀細(xì)胞