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葡聚糖凝膠色譜柱選擇條件:
梯度洗脫在Sephadex使用中并不象在正相柱層析中那么重要,。首先你的樣品須要能溶解在盡量少量的洗脫劑中,。極性在的用甲醇水系統(tǒng);極性小者一般用不含水的系統(tǒng),。我們實驗室常用正己烷二氯甲烷甲醇系統(tǒng),,用了很多年,,效果較好。
(2) 飽和層析柱:
用洗脫劑將凝膠搖勻,,直立柱身,,讓其自然沉降,此時要防止氣泡留在其中,。至少半小時打開開關(guān),,流出幾個柱體種的洗脫劑,目的是使其膨脹在正確比例的洗脫劑中,。
(3) 樣品處理:用盡量少的洗脫劑溶解樣品,,常壓過濾。
(4) 濕法上柱,。這也是要有技巧的步驟,。
(5) 洗脫:控制流速,一般1drop/s以下,,可參見廠家的一些參數(shù);必要時更改極性(很多時一個極性就可以將樣品洗脫完畢),。
再生以備下次使用。
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