“在HPLC日常分析工作中,，有幾個(gè)常見的問題一直困擾著我：色譜柱壽命太短；峰拖尾；保留時(shí)間重現(xiàn)性差,；分不開,；保留弱等。"

遇到以上問題該怎么去排查與優(yōu)化呢,？
我們今天看一下色譜柱壽命短的問題,。
我們分析原因無非是：樣品臟、沒有色譜柱保護(hù)措施,、色譜條件比較嚴(yán),。

01

—

樣品前處理

我們要了解樣品的來源，比如天然產(chǎn)物提取物,、生物樣品,、發(fā)酵產(chǎn)物、合成產(chǎn)物等,。
  如果是天然產(chǎn)物提取物,，我們要做的前處理工作是根據(jù)目標(biāo)物的性質(zhì)，富集目標(biāo)物,，并除去色素等污染色譜柱的成分,；
   如果是生物樣品，來源可能是生物組織,、血液等,，需要去除磷脂、蛋白等污染色譜柱的成分,，并富集低含量的目標(biāo)組分,；如果是發(fā)酵產(chǎn)物，需要去除發(fā)酵液中的糖等營養(yǎng)物質(zhì),、微生物細(xì)胞的破碎后的組分等,，并富集低濃度的目標(biāo)組分；如果是合成產(chǎn)物,，我們要了解反應(yīng)液的殘留成分,、副產(chǎn)物、以及過量的原料等,，對(duì)色譜柱產(chǎn)生污染的成分進(jìn)行適當(dāng)?shù)娜コ?/span>

02

—

柱前保護(hù)

色譜柱的污染來源,，一個(gè)是來自樣品，另一個(gè)是來自流動(dòng)相,。我們?cè)谏V柱前面加一些保護(hù)措施,，以防止來自樣品和流動(dòng)相的污染。在進(jìn)樣器前端可以加上在線過濾器,，防止流動(dòng)相中的污染物進(jìn)入色譜柱,；在色譜柱前端加上保護(hù)柱，以防止樣品中的強(qiáng)保留物等污染物進(jìn)入色譜柱，還可以對(duì)流動(dòng)相的污染物進(jìn)行二次防護(hù),。

03

—

色譜條件優(yōu)化

色譜柱壽命短的另外一個(gè)因素,，就是色譜條件比較高。流動(dòng)相緩沖鹽濃度過高,；流動(dòng)相pH太苛刻,；柱溫過高；柱壓過高,。

流動(dòng)相緩沖鹽濃度太高,，那么緩沖鹽中的機(jī)械雜質(zhì)也可能更多，我們要將緩沖鹽進(jìn)行過膜抽濾處理,；緩沖鹽濃度太高時(shí),，如果梯度后面有機(jī)相比例太高時(shí)會(huì)產(chǎn)生鹽析，堵塞混合器,、進(jìn)樣器,、色譜柱以及管路等，所以有機(jī)相比例不能太高,，或者強(qiáng)洗脫相中加20%水,。

一般硅膠基質(zhì)色譜柱的pH耐受范圍在2-6，如果pH低于2,，硅膠的鍵合相易水解脫落,，如果pH高于7，硅膠填料容易溶解流失,。如果需用到苛刻的pH,，那么建議使用耐寬pH的色譜柱。

一般廠家建議色譜柱耐受50℃以下柱溫,，過高的柱溫可能會(huì)引起色譜柱壽命變短,。

我們有的色譜條件會(huì)使柱壓比較高，比如流動(dòng)相的粘度太大（可以適當(dāng)升高柱溫或者更換粘度低的流動(dòng)相）,；小粒徑色譜柱柱壓會(huì)更高（可以使用高柱效的核殼類色譜柱，大粒徑的核殼色譜柱柱效也不會(huì)降低較多）,。