色譜柱是液相色譜儀的最核心部件,，價格相對昂貴,，如避免強(qiáng)烈的碰撞和震動，不要讓柱床變干,，避免在嚴(yán)寒環(huán)境受凍等,。液相色譜柱的基本結(jié)構(gòu)，是由接頭,、螺帽,、柱管、填料,、墊圈及過濾片等組成,。

01柱頭類型和不銹鋼毛細(xì)管接頭的匹配

色譜柱是消耗品，不是儀器原配的情況很多,。如果接頭和柱頭深度不匹配將會產(chǎn)生漏液或者死體積過大的現(xiàn)象,。接頭比柱頭深度長，不易擰緊而漏液,；接頭比柱頭深度短,，柱頭內(nèi)留有空隙而產(chǎn)生死體積，使譜帶展寬和峰拖尾,。

02                                                        溶劑的匹配轉(zhuǎn)換

色譜柱內(nèi)保存溶劑和儀器系統(tǒng)內(nèi)存留溶劑,，如果和流動相不匹配，使用前需進(jìn)行轉(zhuǎn)換,。特別是流動相含緩沖鹽時,，如保存溶劑是純有機(jī)相或有機(jī)相比例高，直接將新柱接入使用,，會導(dǎo)致緩沖鹽在柱內(nèi)結(jié)晶析出,，最嚴(yán)重會將新柱不可逆地?fù)p壞。                                           正相柱保存溶劑一般為正己烷,，如果要轉(zhuǎn)換成HILIC柱模式使用,，由于正己烷和甲醇乙腈的互溶性不好，轉(zhuǎn)換中間需用二氯甲烷或乙酸乙酯過渡,。

03正確使用緩沖鹽

緩沖鹽通常易溶于水,，難溶于有機(jī)溶劑，因此緩沖鹽使用不當(dāng)會使其析出,，堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,，使填料板結(jié)，柱壓上升,；同時阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低,。緩沖鹽析出后,，去除非常困難，因此,，正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要,。正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話：使用前要過濾,，使用后要沖洗,。

具體方法如下：

1、等度條件：使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動相以1.0mL/min流速沖洗10個柱體積,；使用后去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2mL/min流速沖洗色譜柱過夜,。

2、2,、梯度條件：用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前,，用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0mL/min流速沖洗10個柱體積。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩,，以避免梯度過程中緩沖鹽析出,。注意：過渡流動相是指有機(jī)相和水相的組成與分析流動相相同，區(qū)別只是過渡流動相不含緩沖鹽,。

3,、3、緩沖鹽析出的補(bǔ)救方法：1）方案1：用甲醇/水=20/80以1.0mL/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min,；2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2mL/min流速反向沖洗色譜柱過夜,。

04新柱使用前的平衡和老化

廠家出廠檢驗時一般都已進(jìn)行過平衡，但色譜柱到最終用戶時間不一,，用戶正式測定前最好對色譜柱再次平衡,。平衡兼老化一起進(jìn)行的方法是運行幾次完整的分析程序（包括進(jìn)樣），直到觀察到峰形,、保留時間和峰面積穩(wěn)定為止,。所謂“老化"是借用了氣相的術(shù)語，目的是達(dá)到分析物在色譜柱以及整個液相系統(tǒng)流路中的吸附飽和,。對某些特定的待測物,，如分子量大于1000的，因擴(kuò)散速度慢,，老化時間相應(yīng)要長,，可采取大濃度進(jìn)樣或在同一個洗脫周期內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣多針的方式加快老化。

   pH使用范圍

一般認(rèn)為硅膠基質(zhì)柱子的pH使用范圍是2-8,，這是很粗略的,。硅膠類型,、使用溫度、硅膠表面所鍵合的固定相類型以及緩沖鹽的不同,，對此均有影響,。硅膠比孔容小、鍵合密度大的填料pH耐受范圍要大一些,，有些選用高品質(zhì)硅膠,，加上高密度鍵合和雙封尾，或特殊工藝使pH耐受范圍最大提高到10,。磷酸鹽緩沖鹽滲透力強(qiáng),，有加快硅膠溶解的副作用，它的存在會降低pH使用范圍,。有機(jī)雜化硅膠以及硅膠表面涂覆雜化層的硅膠填料,，有機(jī)質(zhì)的存在使pH使用范圍能到12以上。拿到柱子第一時間閱讀說明書,，確認(rèn)色譜柱內(nèi)的封存液,，有條件可以依照COA報告做柱效測試。

06

色譜柱保存

短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流動相（不含緩沖鹽）保存為佳,，以盡量減少下次使用的平衡時間,。一般只建議在長期保存反相柱的時候用純甲醇或乙腈，一方面純有機(jī)相保存有最大限度減少鍵合相水解的作用,，但純甲醇（乙腈）又會將已水解而暫時吸附在柱內(nèi)的鍵合相洗脫出去,，使固定相流失進(jìn)程加快，壽命縮短,。純有機(jī)相保存還有易揮發(fā)使柱床變干的缺點,，使用80%左右有機(jī)相保存也屬好的選擇，且足以避免長菌,。強(qiáng)烈建議在柱身上貼標(biāo)簽標(biāo)明保存溶劑,。離子交換柱和水性SEC柱等適合保存在水溶液中的色譜柱，可加0.05%NaN3溶液防止長菌,。正相柱,，無論是短期還是長期，都推薦保存在所用流動相中,。