液相液相色譜柱的性能主要取決于填料的性質(zhì)和類型。填料的大小,、形狀,、鍵合相、含碳量等均能影響液相色譜柱的性能,，這對我們使用及選擇色譜柱都是非常有幫助的,。

常見的液相色譜柱填料有 C1、C3,、C4,、C8、C18,、C30,、氨基、氰基,、硅膠色譜柱等,。

常見色譜柱中的填料分類：

1，反相（與離子對）方法

C18（十八烷基或ODS）：普適性好,；保留性強(qiáng),，用途廣

C8（辛基）：與C18相似，但保留值稍小

C3,，C4：保留值??；大多用于肽類與蛋白質(zhì)

C1【三甲基硅烷（TMS）】：保留值最小,；最不穩(wěn)定

苯基,，苯乙基：保留值適中；選擇性有所不同

CN（氰基）：保留值適中,；正相和反相均可使用

NH2（氨基）：保留性弱,；用于烴類；欠穩(wěn)定

聚苯乙烯基b：在1＜PH＜13的流動相中穩(wěn)定,；對某些分 離峰形好,，柱子壽命長
   

 2、正相方法

CN（氰基）：普適性好,；極性適中,；用途廣

OH（二醇基）：極性大于CN

NH2（氨基）：極性大，欠穩(wěn)定

硅膠b：普適性好,；價(jià)廉,；操作欠方便；用于制備LC
   

3,、空間排阻方法

硅膠b：普適性好,；作吸附劑用

硅烷化硅膠：吸附性弱，溶劑兼容性好,；適用于有機(jī)溶劑

OH（二醇基）：欠穩(wěn)定,；在水SEC中使用（凝膠過濾）

聚苯乙烯基b：廣泛用于有機(jī)SEC（凝膠滲透）；一般與水和極性大的有機(jī)溶劑不不相容

4,、離子交換方法

鍵合相：穩(wěn)定性與重現(xiàn)性均不好聚苯乙烯基b：柱效不高,；穩(wěn)定；重現(xiàn)性好

填料對液相色譜柱性能的影響

填料對液相色譜柱性能的影響

1,、粒徑的影響

 液相色譜柱填料的平均粒徑越小,，渦流擴(kuò)散越小，傳質(zhì)越好,，柱效越高,，然而，填料粒徑小,，導(dǎo)致滲透性能變差,，柱壓較高。同時(shí),，填料粒徑分布越寬,，滲透性能越差，色譜柱柱效越低,。常見的填料粒徑有 3μm,、3.5μm,、5μm、10μm 等,。

2,、形狀的影響

液相色譜柱的填料分為無定型和球型。無定型填料制備的液相色譜柱柱床結(jié)構(gòu)不均勻,，流動相線性速度不均勻,，色譜圖的峰形較寬；球型填料制備的液相色譜柱柱床結(jié)構(gòu)均勻,，因此色譜柱柱效高,、重現(xiàn)性好。球型填料是目前最為常見的液相色譜柱填料,，這種填料具有更好的性能和重現(xiàn)性,。

3、鍵合相的影響

以硅膠為基質(zhì),，通過化學(xué)鍵合的方式把 C18,、C8、氨基,、氰基等基團(tuán)鍵合在基質(zhì)上， 作為液相色譜柱中的填料,。通過鍵合不同的化學(xué)基團(tuán),，得到不同性能的液相色譜柱。由于不同鍵合基團(tuán)的分離機(jī)理不同,，從而影響化合物的保留與分離,。填料的鍵合使得液相色譜柱的固定相相對較為穩(wěn)定，不易流失,，同時(shí)很大程度上消除了硅羥基的不良影響,，可適用于多種流動相中，應(yīng)用廣泛,。然而,，鍵合后的填料耐酸性較差，pH 值不能小于 2,，當(dāng)流動相 pH 超出酸性范圍時(shí),，鍵合相易流失，耐用性和穩(wěn)定性會變差,。

4,、端基封口的影響

硅膠因具有特殊的表面化學(xué)特性，被廣泛用作液相色譜柱填料基質(zhì)材料,。硅膠表面具有硅羥基,，硅羥基的密度,、分布、及其化學(xué)特性對各種類型的色譜行為都會產(chǎn)生不同程度的影響,。在使用以硅膠為基質(zhì)的高效液相色譜柱特別是在反相色譜柱時(shí),，經(jīng)常會遇到因游離的硅羥基（或稱為硅醇基）而導(dǎo)致的非特異性吸附。對一些極性較強(qiáng)的溶質(zhì),，如堿性物質(zhì),， 色譜峰會嚴(yán)重拖尾，甚至?xí)驈?qiáng)吸附而不能洗脫,。通常采用封尾的方式減少硅羥基的影響,， 具體做法是將填料與小硅烷（如三甲基氯硅烷）進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)，反應(yīng)掉部分殘余硅羥基,， 以增加表面覆蓋率,。采用該方式不僅可以減少不可逆吸附或拖尾，還能增加碳含量,。但是,， 該方式并不能反應(yīng)掉殘余的硅羥基，仍有 50%的硅羥基未被反應(yīng),。

5,、含碳量的影響

  液相色譜柱填料，特別是反相填料的含碳量,，常被用于表征表面化學(xué)修飾程度,。通常通過鍵合作用將碳鏈引入到填料中，填料含碳量越高,，說明碳鏈密度越高,，碳鏈越長，容量因子越大,，疏水性越強(qiáng),。在反相條件中，碳鏈增長,，意味著填料具有更大的比表面積,， 締合作用增強(qiáng)，待測物質(zhì)保留增加,。因此,，高含碳量填料的液相色譜柱穩(wěn)定性好，重復(fù)性好,，有利于保留效果差的化合物的分離,，可以改善極性化合物的拖尾；低碳量填料的液相色譜柱有利于分析中性及堿性化合物，可以降低溶劑損耗,。

6,、其他因素的影響

除上述情況外，硅膠填料的活性,、雜質(zhì)含量,、pH 穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性等也會影響液相色譜柱性能,。生產(chǎn)硅膠時(shí),，處理溫度不同，硅膠活性也不同,。硅膠的活性是選擇性差異的主要來源,， 主要影響堿性化合物的保留行為；硅膠的雜質(zhì)含量是色譜柱質(zhì)量好壞的重要標(biāo)志,，重金屬含量低,，硅羥基活性小，拖尾減小,。