當(dāng)前位置:北京科譽興業(yè)科技發(fā)展有限公司>>技術(shù)文章>>定量PCR儀的應(yīng)用
定量PCR儀的應(yīng)用
實時熒光定量PCR技術(shù)(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction簡稱Real Time PCR)是在定性PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的核酸定量技術(shù),。
實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied biosystems公司推出,,在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,,使每一個循環(huán)變得“可見”,,后通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線對樣品中的DNA(orcDNA)的起始濃度進行定量的方法,。
實時熒光定量PCR是目前確定樣品中DNA(或cDNA)拷貝數(shù)敏感、準(zhǔn)確的方法,。如果用于RNA檢測,,這被稱為逆轉(zhuǎn)錄實時PCR即(Real-time RT-PCR)是實時PCR法,,它是指對DNA或經(jīng)過反轉(zhuǎn)入(RT-PCR)的RNA通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)并實時監(jiān)測DNA的放大過程,在擴增的指數(shù)增長期就測量擴增產(chǎn)物,,因為擴增指數(shù)增長期測量值與特異DNA(RNA)起始量存在相關(guān)性,,從而實現(xiàn)定量檢測。RealTime PCR的基本目標(biāo)是測量和鑒別非常微量的特異性核酸,,從而可通過監(jiān)測CT值而實現(xiàn)對原始目標(biāo)基因的含量定量。實時熒光定量PCR法大的優(yōu)點是克服了終點PCR法進入平臺期或叫飽和期后定量的較大誤差,,實現(xiàn)DNA/RNA的定量,。該技術(shù)不僅實現(xiàn)了對DNA/RNA模板的定量,而且具有靈敏度和特異性高,、能實現(xiàn)多重反應(yīng),、自動化程度高,、無污染、實時和準(zhǔn)確等特點,,該技術(shù)在醫(yī)學(xué)臨床檢驗及臨床醫(yī)學(xué)研究方面有著重要的意義,。