流式細(xì)胞儀工作原理

將待測細(xì)胞染色后制成單細(xì)胞懸液,。用一定壓力將待測樣品壓入流動室，不含細(xì)胞的磷酸緩沖液在高壓下從鞘液管噴出,，鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度,，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動,，組成一個圓形的流束,，待測細(xì)胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測區(qū)域,。

　　 流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源,。經(jīng)過聚焦整形后的光束，垂直照射在樣品流上,，被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下,，產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。這兩種信號同時被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管接收,。光散射信號在前向小角度進行檢測,，這種信號基本上反映了細(xì)胞體積的大小,；熒光信號的接受方向與激光束垂直,，經(jīng)過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個不同波長的熒光信號,。

　　 這些熒光信號的強度代表了所測細(xì)胞膜表面抗原的強度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度,，經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號，再通過 A／D轉(zhuǎn)換器,，將連續(xù)的電信號轉(zhuǎn)換為可被計算機識別的數(shù)字信號,。計算機把所測量到的各種信號進行計算機處理，將分析結(jié)果顯示在計算機屏幕上,，液可以打印出來,，還可以數(shù)據(jù)文件的形式存儲在硬盤上以備日后的查詢或進一步分析。

　　 檢測數(shù)據(jù)的顯示視測量參數(shù)的不同由多種形式可供選擇,。單參數(shù)數(shù)據(jù)以直方圖的形式表達,，其X軸為測量強度，Y軸為細(xì)胞數(shù) 目,。一般來說,，流式細(xì)胞儀坐標(biāo)軸的分辨率有512或1024通道數(shù),，這視其模數(shù)轉(zhuǎn)換器的分辨率而定。對于雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù),， 既可以單獨顯示每個參數(shù)的直方圖,，也可以選擇二維的三點圖、等高線圖,、灰度圖或三維立體視圖,。