NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒廣泛存在于動物,、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,，催化蘋果酸形成草酰乙酸,；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸,。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物,， 連接多條重要的代謝途徑。

NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒

商品詳情：
測定意義：

MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動物、植物,、微生物和培養(yǎng)細胞中,，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸,；相反,，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物,， 連接多條重要的代謝途徑,。因此，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色,，包括線粒體的能量代謝,、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等,。根據(jù)不同的輔酶特異性,，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細菌中通常只含有NAD-MDH,，在真核細胞中,，NAD-MDH分布?杈?

測定原理：

NAD-MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降,。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機,、水浴鍋,、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水,。
樣品中AA提?。?/span>

1.按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行室溫勻漿,，然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中,，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min；自來水冷卻后,，8000g,，，4℃離心10min,，上清液置冰上待測,。

2.細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一）,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s,，間隔10s,，重復30次）；8000g,，4℃離心10min,，取上清，置冰上待測,。

3.血清等液體：直接檢測,。

計算公式如下：

1、血清（漿）LAP活力的計算:

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位,。

LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2,、組織、細菌或細胞中LAP活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位,。

LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位,。

LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總：反應體系總體積,，2×10-4 L,；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V樣：加入樣本體積,，0.05 mL,；V樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應時間,，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；2000：細菌或細胞總數(shù),，2000萬。

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注意事項：

1. 試劑盒中試劑三,、試劑四和標準品均需臨用前配制,，且避光保存，配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢,。

2. 為保證實驗結(jié)果的準確性,，需先取1-2個樣做預實驗,，如果測定的吸光值過高（高于2.5），用蒸餾水稀釋后再測定,。

3. 與茚三酮反應在570nm處無吸收峰,，因此，570nm處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量,。

4．檢出限為100μmol/L,。