蘋果酸合酶(MS)測試盒

商品詳情：
測定意義：                          

蘋果酸合酶(MS，EC 4.1.3.2)是屬于轉(zhuǎn)移酶中?；D(zhuǎn)移酶的一類,，主要存在于植物和微生物中。MS是乙醛酸循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,，在MS催化下乙醛酸與乙酰fu酶A反應(yīng)生成蘋果酸,。

測定原理：

MS催化乙酰CoA和乙醛酸產(chǎn)生蘋果酸，同時生成fu酶A,，fu酶A使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,，在 412nm處有特征吸光值。

需自備的儀器和用品：

酶標(biāo)儀,、臺式離心機(jī),、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、96孔板,、研缽、冰,、和蒸餾水
樣品中AA提?。?/span>

1.按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行室溫勻漿,，然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中,，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min；自來水冷卻后,，8000g,，，4℃離心10min,，上清液置冰上待測,。

2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一）,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W,，超聲3s,，間隔10s，重復(fù)30次）,；8000g,，4℃離心10min,，取上清，置冰上待測,。

3.血清等液體：直接檢測,。

計算公式如下：

1、血清（漿）LAP活力的計算:

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位,。

LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2,、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位,。

LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位,。

LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積,，2×10-4 L,；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V樣：加入樣本體積,，0.05 mL,；V樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應(yīng)時間,，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；2000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，2000萬。

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注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒中試劑三,、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制,，且避光保存，配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢,。

2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，需先取1-2個樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),，如果測定的吸光值過高（高于2.5）,，用蒸餾水稀釋后再測定。

3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰,，因此,，570nm處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量,。

4．檢出限為100μmol/L。