本產(chǎn)品僅用于科研,，不用于臨床

羊小反芻獸疫病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說(shuō)明書（山羊）

【產(chǎn)品名稱】
通用名：羊小反芻獸疫病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Goat Peste des Petits Ruminants Virus （ELISA）
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒,、96T×2/盒
【預(yù)期用途】 小反芻獸疫是由小反芻獸疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV）引起的一種急性接觸性傳染病,，其特征為口腔,、舌粘膜糜爛、流淚,、流鼻液,。本病的易感動(dòng)物為山羊，也可感染綿羊,、白尾鹿等,，但對(duì)牛無(wú)感染性。
本試劑用于檢測(cè)山羊血清中小反芻獸疫病毒抗體,，可用于小反芻獸疫疫苗免疫效果評(píng)價(jià),。
【原    理】
    本試劑盒系由預(yù)包被小反芻獸疫病毒重組抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)羊血清,、血漿樣本中小反芻獸疫病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,，經(jīng)溫育后若樣品中含有小反芻獸疫病毒抗體,，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,；再加入酶標(biāo)記物,，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液,，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后,，產(chǎn)物變?yōu)?；用酶?biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有小反芻獸疫病毒抗體,。
【試劑盒組成】 

【儲(chǔ)存及有效期】儲(chǔ)存于陰涼干燥處（2-8℃）,，有效期期12個(gè)月。
    包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存,，避免受潮。使用期限為2個(gè)月,。
【適用儀器】 含450nm,、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備,，可調(diào)微量移液器,。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮,，無(wú)溶血,、無(wú)污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存,，長(zhǎng)期需置-20℃保存,。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）,。陰,、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋,。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫,。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,，設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔,，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存。
3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl,；陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰,、陽(yáng)性對(duì)照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。
4.混勻,，置37℃（推薦水浴）反應(yīng)30分鐘,。
5.扣去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次,，拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應(yīng)30分鐘,。
7.洗滌，同步驟5,。
8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl，混勻,，37℃避光反應(yīng)10分鐘,。
9.每孔加終止液50μl，混勻,，用空白孔調(diào)零,，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值）。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,，陰性對(duì)照≤0.10,，陽(yáng)性對(duì)照≥0.6。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.樣品A值≥0.38為陽(yáng)性,；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑,；樣品A值＜0.2為陰性。
2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性或可疑時(shí)表明羊只抗體水平不足,，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗,。
【試驗(yàn)方法的局限性】
    該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)山羊血清、血漿中小反芻獸疫病毒抗體,，根據(jù)A值高低可作抗體水平強(qiáng),、中、弱的粗略評(píng)估,。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套,、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
2.終止液具有腐蝕性,，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗,。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解,。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈,。
6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮,。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號(hào)試劑組分不得混用,。