本產(chǎn)品僅用于科研,，不用于臨床

新城疫病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說明書

【產(chǎn)品名稱】
通用名：新城疫病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Newcastle Disease Virus （ELISA）
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒,、96T×2/盒
【預(yù)期用途】 新城疫又名偽雞瘟或亞洲雞瘟，是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus,，NDV）引起的禽類的一種急性高度接觸性傳染病,，以呼吸困難、下痢,、神經(jīng)機能紊亂,、粘膜出血為特征,。
本試劑用于檢測雞,、鴨、鵝等禽類血清,、血漿或蛋黃中新城疫病毒抗體,，可用于免疫效果評價、輔助診斷等,。
【原    理】
    本試劑盒系由預(yù)包被新城疫病毒抗原的酶標(biāo)板,、抗體工作液、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用競爭酶聯(lián)免疫法原理檢測禽類血清,、血漿或蛋黃中新城疫病毒抗體。實驗時在酶標(biāo)板中加入稀釋的待檢樣本和抗體工作液,，若樣品中含有新城疫病毒抗體則將阻斷抗體工作液與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,，從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色；反之則出現(xiàn)顯色,；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)?；用酶?biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有新城疫病毒抗體。
【試劑盒組成】 

【儲存及有效期】 于2～8℃避光保存,，有效期為12個月,。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮,。使用期限為2個月,。
【適用儀器】 含450nm,、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備,，可調(diào)微量移液器,。
【樣品準(zhǔn)備】
1.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水20倍稀釋成工作洗滌液,。
2.血清/血漿：取動物全血按常規(guī)方法制備血清或血漿,，要求血清/血漿清亮，無溶血,、無污染,。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存,。
      蛋黃：取2ml新鮮蛋黃加2ml生理鹽水震蕩混勻,，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，取上清作為樣本,。
3.用工作洗滌液將待檢血清,、血漿或已處理蛋黃樣本按5倍稀釋（如10μl樣本加入40μl工作洗滌液中，混勻）,。陰,、陽性對照不用稀釋。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫,。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性/陽性對照各2孔,，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存。
3.陰,、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照50μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品50μl,。
4.每孔加抗體工作液50μl,，混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘,。
5.甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次,，拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，置37℃反應(yīng)30分鐘,。
7.洗滌,，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl,，混勻，37℃避光反應(yīng)15分鐘,。
9.每孔加終止液50μl,，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）,。
【參考值】 實驗正常的情況下,，陰性對照吸光值≥1.0，陽性對照PI≥50%,。
【檢驗結(jié)果的解釋】
1.PI（阻斷率）=（1-樣本值/陰性對照孔均值）×100%,，PI≥50%為陽性；PI＜50%為陰性,。
2.未曾免疫雞群：結(jié)果為陽性時表明可能有感染,，需結(jié)合臨床資料進行分析。
3.免疫雞群：監(jiān)測并記錄樣本當(dāng)時的抗體水平,，根據(jù)結(jié)果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動向,。
【試驗方法的局限性】
    該試驗僅作為定性檢測新城疫病毒抗體,，根據(jù)PI值高低可作抗體水平強,、中、弱的粗略評估,。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套,、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗,。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶,，使用時需恢復(fù)至室溫以*溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈,。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號試劑組分不得混用,。