本產(chǎn)品僅用于科研,，不用于臨床

豬傳染性胃腸炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說明書

【產(chǎn)品名稱】
通用名：豬傳染性胃腸炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Transmissible Gastroenteritis Virus (ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【預(yù)期用途】 豬傳染性胃腸炎是由豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissible Gastroenteritis Virus,，TGEV）引起的豬的一種高度接觸性消化道傳染病,。以嘔吐、水樣腹瀉和脫水為特征,。
本試劑盒用于檢測豬血清,、血漿中豬傳染性胃腸炎病毒抗體,，可用于豬傳染性胃腸炎病毒疫苗免疫效果評價。
【原    理】
    本試劑盒系由預(yù)包被豬傳染性胃腸炎病毒重組N蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬傳染性胃腸炎病毒抗體,。實驗時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本,，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬傳染性胃腸炎病毒抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)?；用酶?biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有豬傳染性胃腸炎病毒抗體。
【試劑盒組成】 

【儲存及有效期】 于2～8℃避光保存,，有效期為12個月,。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮,。使用期限為2個月,。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀,，37℃恒溫設(shè)備,，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮,，無溶血、無污染,。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存,，長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,，混勻）,。陰、陽性對照不用稀釋,。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋,。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫,。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl,；陰,、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。
4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘,。
5.扣去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次,，拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應(yīng)30分鐘,。
7.洗滌，同步驟5,。
8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl，混勻,，37℃避光反應(yīng)10分鐘,。
9.每孔加終止液50μl,，混勻,，用空白孔調(diào)零,，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）,。
【參考值】 實驗正常的情況下,，陰性對照≤0.10，陽性對照≥0.6,。
【檢驗結(jié)果的解釋】
1.樣品A值≥0.38為陽性,；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑；樣品A值＜0.2為陰性,。
2.本實驗結(jié)果為陰性或可疑時表明豬只抗體水平不足,，建議補打相應(yīng)疫苗,。
【試驗方法的局限性】
    該試驗僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬傳染性胃腸炎病毒抗體,，根據(jù)A值高低可作抗體水平強,、中、弱的粗略評估,。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套,、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗,。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶,，使用時需恢復(fù)至室溫以*溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈,。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。
8.不同批號試劑組分不得混用,。