科研ELISA試劑盒是干什么用的,，又該怎么用呢,？科研ELISA試劑盒即酶聯(lián)吸附試驗(yàn)，是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法,。Engvall 和Perlmann于1971年應(yīng)用該法進(jìn)行了IgG定量測(cè)定,，并命名為"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。

科研ELISA試劑盒免疫測(cè)定的目的：

1.測(cè)定體液中的各種蛋白質(zhì),，包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等,；

2.測(cè)定激素，包括小分子量的甾體激素等,；

3.測(cè)定抗生素和藥物,；

4.測(cè)定病原體抗原，HBsAg,、HBeAg等,；

5.利用純化的抗原檢測(cè)標(biāo)本中的抗體，例如抗-HBs等,；

ELISA的基本原理

①使抗原（或抗體）結(jié)合到某種固相載體表面,，并保持其免疫活性；

②使抗原（或抗體）與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo) 抗原（或抗體）,，而且此酶標(biāo)抗原（或抗體）既保留其免疫活性,，又保留其酶活性；

③測(cè)定時(shí)將受檢標(biāo)本（抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原（或 抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進(jìn)行反應(yīng),，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其它物質(zhì)分開,，后結(jié)合 在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的抗體或抗原量成一定比例；再加入酶反應(yīng)底物后,，底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)物,，根據(jù)其顏色反應(yīng)的 深淺進(jìn)行定性或定量分析，以了解被測(cè)標(biāo)本中抗體或抗原含量,。

科研ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定,。但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求,，在中 除正常反應(yīng)外,，有時(shí)常可見到一些錯(cuò)誤結(jié)果（即假陽性或假陰性結(jié)果）,。引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素,；②試劑因素；③操作因素,。本文就標(biāo)本因素對(duì)ELISA測(cè)定的影響做如下討論,。

科研ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

1.包被,；

2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí),。然后洗滌(同時(shí)做空白孔,，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)；

3.加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌,。

4.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘；

5.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,；

6.結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無色或極淺,。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,。

血清是ELISA標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,，標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種。