EA01C00                     2018-01版

豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng)：豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒

英文名稱(chēng)：Blocking ELISA Kit For Classical Swine Fever Virus Antibody test

【規(guī)格】

96T×2/盒

【用途】

用于檢測(cè)血清中豬瘟病毒抗體,，適用于對(duì)豬場(chǎng)豬瘟疫苗免疫狀況的評(píng)價(jià)以及感染豬的血清學(xué)診斷,。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒是用來(lái)檢測(cè)豬血清中豬瘟病毒抗體的試劑盒。該試劑盒是用豬瘟病毒抗原包被的微量反應(yīng)板,，利用阻斷ELISA原理來(lái)檢測(cè)豬血清中豬瘟病毒抗體,。用酶標(biāo)儀在雙波長(zhǎng)(450nm，630nm)測(cè)定該反應(yīng)體系的吸光度,。當(dāng)被測(cè)樣品中含有豬瘟病毒抗體(陽(yáng)性結(jié)果)時(shí),，顯色就會(huì)變淺，當(dāng)被測(cè)樣品中不含有抗豬瘟病毒抗體(陰性結(jié)果)時(shí),，顏色就會(huì)變深,。樣本的阻斷率可以通過(guò)與陰性對(duì)照吸光度的比值來(lái)確定。

【主要組成成份】

【自備器材】

1．酶標(biāo)儀：雙波長(zhǎng)450/630nm濾光片

2．精確的微量移液器（單道1-100ul,、0.5-10ul,、多道30-300ul）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．洗液吸移裝置

6．一次性槍頭（10ul,，200ul）

7．去離子水

【樣本要求】

本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清或血漿,，樣本應(yīng)無(wú)菌采集，2℃～8℃貯存應(yīng)不超過(guò)一周,，長(zhǎng)期應(yīng)在-20℃以下保存,。

【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】

1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前，先取出置室溫30min,，可以獲得jia結(jié)果,。

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本和陰性陽(yáng)性對(duì)照血清作2倍稀釋?zhuān)矗?0μl血清加60μl樣本稀釋液）,，混合均勻。

3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（即1ml濃縮洗滌液加19ml水）,，即可使用,。注意：使用前要使結(jié)晶*溶解。

【檢驗(yàn)方法】

1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量,，取所需板條,，檢測(cè)時(shí)，設(shè)陰,、陽(yáng)性對(duì)照各2孔,，分別加入稀釋好的陰性、陽(yáng)性對(duì)照血清100μl于相應(yīng)孔中,。其余為樣本孔,，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗(yàn)）。

2．溫育：加樣后,，蓋上蓋板膜,，置37℃溫育120分鐘。

3．洗板：甩去孔內(nèi)液體,，用洗滌液注滿(mǎn)反應(yīng)板孔,，靜置10秒，直接甩出,，洗滌3次,，后一次洗滌后在吸水紙上拍干板內(nèi)液體。

4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100μl,。

5. 溫育：加好酶標(biāo)記物的反應(yīng)板蓋好蓋板膜,，置37℃溫育30分鐘。

6．洗板：同步驟3,。

7．顯色：每孔加顯色劑100μl,，振蕩混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘,。

8．終止：每孔加終止液50μl,，振蕩10秒，充分混勻,，終止后即讀數(shù),。

9．讀數(shù)：以450nm/ 630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)，讀取各孔吸光度值（OD值）,。

【結(jié)果判定】

在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔OD值,，試驗(yàn)成立條件是陰性對(duì)照OD值大于1.0，陽(yáng)性對(duì)照的阻斷率均大于50％，若試驗(yàn)不成立,，有可能是操作失誤造成,，應(yīng)重讀說(shuō)明書(shū)，再操作一次,。

S=樣品孔OD值,，N=陰性對(duì)照孔平均OD值

阻斷率=(1–S/N)×100%

若被檢樣品的阻斷率小于或等于30%，該樣品判為CSFV陰性,。

若被檢樣品的阻斷率大于或等于40%,，該樣品判為CSFV陽(yáng)性。

若被檢樣品的阻斷率在30%~40%之間,，該樣品判為可疑,。

【注意事項(xiàng)】

1．本試劑盒僅供研究使用。

2．不要使用過(guò)期的試劑盒組分,，不要把不同批次的組分混合使用,。

3．使用試劑盒之前，一定要仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū),。

4 使用前,，濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫（20～25℃），并搖動(dòng)使沉淀溶解（hao在37℃水浴鍋中加熱5～10分鐘）,，然后用去離子水作20倍稀釋（例如：50ml的濃縮洗滌液加上950ml蒸餾水）,，混勻，稀釋好的洗滌液在2～8℃可以存放7-10日,。

5．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待,，試驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄,。

6．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡,。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存,。

7．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。

8．加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿(mǎn)而不溢,，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染,。

9．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈,。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

于2℃～8℃避光保存,，防止冷凍，有效期12個(gè)月,。

【生產(chǎn)日期及批號(hào)】

詳見(jiàn)包裝袋和外包裝盒,。

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