豬衣原體抗體檢測(cè)試劑盒

使用說(shuō)明書

介紹

豬衣原體（Swine Chlamydiosis,SCH）抗體檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)豬血清中的MHP抗體,，評(píng)估養(yǎng)豬場(chǎng)SCH疫苗免疫狀況及感染豬的血清學(xué)輔助診斷。

本試劑盒采用間接ELISA法,，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被純化的SCH抗原,。在試驗(yàn)中，加入稀釋后的待檢血清，經(jīng)過(guò)溫育后,，若樣品中含有SCH特異性抗體,，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后,；再加入酶標(biāo)二抗,，與檢測(cè)板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,；在微孔中加入TMB底物液,，經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入終止液終止反應(yīng)后,，用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定反應(yīng)孔中的吸光度A值,。

組份

需自備的設(shè)備及試劑

1. 微量移液器： 0.5µl～10µl、10µl～100µl,、100µl～1000µl,。

2. 一次性移液器吸頭。

3. 量筒：500ml,。

4. 96孔板酶標(biāo)儀,。

5. 蒸餾水或去離子水。

6. 洗瓶或洗板機(jī),。

樣品制備

取動(dòng)物全血,，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮,，無(wú)溶血,。

洗滌液的準(zhǔn)備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶,，搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右,。

樣品的稀釋

在血清稀釋板中按1：100的體積比稀釋待檢血清,。

注意：陰性和陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。取每個(gè)樣品后都要更換吸頭,，準(zhǔn)確記錄每個(gè)樣品在板上的位置,。每個(gè)樣品在加入到包被板微孔前應(yīng)充分混勻。

注意事項(xiàng)

1. 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,，使用前應(yīng)搖勻,，使用后放回2～8℃。

2. 不同品種,、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用,，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。

3. 底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù),。

4. TMB（顯色液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑,。

5. 檢測(cè)板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2～8℃),。

6. 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染,。

7. 嚴(yán)格遵守操作說(shuō)明可以獲得最好的結(jié)果。操作過(guò)程中移液,、定時(shí)和洗滌等的全部過(guò)程必須精確,。

8. 血清稀釋板為一次性用品，不得重復(fù)使用,；血清稀釋板的最大容量為300μl/孔。

操作步驟

1. 取預(yù)包被的檢測(cè)板（根據(jù)樣品多少,，可拆開(kāi)分次使用）,，將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測(cè)板孔中。同時(shí)設(shè)陰性,、空白對(duì)照各1孔,，陽(yáng)性對(duì)照2孔，取陰性及陽(yáng)性對(duì)照各100μl分別加入反應(yīng)孔中,，空白對(duì)照僅加入100μl樣本稀釋液,。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。

2. 蓋上封板膜（可按實(shí)際需要自行裁剪）,，置37℃溫育30分鐘,。

3. 小心揭開(kāi)封板膜，甩掉板孔中的溶液,，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復(fù)4-6次,，最后在干凈吸水紙上拍干,。

4. 每孔加酶結(jié)合物50μl，蓋上封板膜,，置37℃溫育30分鐘,。

5. 小心揭開(kāi)封板膜，甩掉板孔中的溶液,，洗滌4-6次, 方法同3,。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

6. 每孔先加顯色液100µl,，輕微震蕩混勻,、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。

7. 每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止,，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果,。

結(jié)果判定

以空白對(duì)照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長(zhǎng)）讀取吸光度A值。

有效性判斷：

陰性對(duì)照值<0.2,，同時(shí)陽(yáng)性對(duì)照值>0.4,。

計(jì)算方法：

樣品OD值/陽(yáng)性對(duì)照OD均值=S/P值。

陰陽(yáng)性判斷：

S/P值≥0.5則判斷為陽(yáng)性,；

S/P值＜0.5則判斷為陰性,。

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個(gè)月,。

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