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果膠裂解酶（PL）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作,。
貨號: BC2640
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1. 工作液：將試劑一倒入試劑二于50℃水浴中溶解（期間可拿出振蕩數(shù)次）,。該試劑易長菌,，配制完成后可-20℃分裝保存,，可保存12周,。

產(chǎn)品說明：
果膠裂解酶（EC4.2.2.10）是果膠酶的重要組成部分,，催化果膠分子鏈的消除裂解,。來源比較廣泛,，主要來源于微生物,，在食品加工工業(yè)中提高果汁產(chǎn)量方面有重要意義,，在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面也具有潛在的應(yīng)用價值。果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵,，生成在還原端C4和C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸，在235nm處有特征吸收峰，測定235nm下吸光度的上升來表示果膠裂解酶的活性,。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì),、臺式離心機(jī),、恒溫水浴鍋,、1mL石英比色皿,、可調(diào)式移液槍,、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水,。
操作步驟：
一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿,。10000g,，4℃離心10min，取上清，置冰上待測,。

2. 細(xì)胞,、細(xì)菌或真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w,，超聲3秒，間隔7秒,，總時間3min）；然后10000g,，4℃離心10min,，取上清置于冰上待測,。（細(xì)菌、真菌等難以數(shù)量計(jì)算的微生物也可以稱取0.1g 細(xì)菌/真菌沉淀來進(jìn)行前處理）

3. 培養(yǎng)液：直接測定,。

二,、測定步驟

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至235nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2. 操作表：(在1.5mL離心管中)

三、果膠裂解酶活性計(jì)算

1. 按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：在40℃,，pH5.5條件下,，每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹÷（V樣×Cpr）÷T=64.1×ΔA÷Cpr

1. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在40℃,，pH5.5條件下,，每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性（U/g 質(zhì)量）=ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 64.1×ΔA÷W

1. 按照細(xì)菌,、真菌貨細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義：在40℃,，pH5.5條件下，每10⁴個細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位,。
PL活性（U/10⁴ cell）= ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹÷（V樣×N÷V樣總）÷T= 64.1×ΔA÷N

1. 按照培養(yǎng)液體積計(jì)算

酶活性定義：在40℃,，pH5.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位,。
PL活性（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹÷V樣÷T= 64.1×ΔA
ε：不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù),，5200 L/mol/cm；d：比色皿光徑,，1cm,；V反總：反應(yīng)總體積，0.001L,；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積,，0.1mL；V樣總：加入提取液體積,，1mL,；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；T：反應(yīng)時間,，30min,；10⁹：換算系數(shù)，1mol=10⁹nmol,；N：細(xì)胞數(shù)量,，以萬計(jì)。
注意事項(xiàng)：

1. 若A1測定管大于1.5或者ΔA大于0.5,，將樣本粗酶液用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測定,。

2. 建議一次測定不要測定過多樣本以免耽誤過多的酶促反應(yīng)時間。

3. 空白管正常情況下變化不超過0.02,。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g香蕉皮加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,。10000g ,，4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。之后按照測定步驟操作，測得計(jì)算ΔA測定管= A2測定管-A1測定管=0.43-0.421=0.009,，ΔA空白管= A2空白管-A1空白管=0.217-0.217=0,，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

PL活性（U/g 質(zhì)量）= 64.1×ΔA÷W=5.526 U/g 質(zhì)量。

1. 取0.1g大腸桿菌沉淀加入1mL提取液冰浴超聲波破碎細(xì)胞,，然后10000g,，4℃離心10min，取上清置于冰上,，之后按照測定步驟操作,，測得計(jì)算ΔA測定管=A2測定管-A1測定管=1.352-0.923=0.429，ΔA空白管= A2空白管-A1空白管=0.217-0.217=0,，按照樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

PL活性（U/g 質(zhì)量）= 64.1×ΔA÷W=274.99 U/g 質(zhì)量,。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC2630/BC2635 果膠酶活性檢測試劑盒
BC3680/BC3685 原果膠含量檢測試劑盒
BC4150/BC4155 離子結(jié)合型果膠（ISP）含量檢測試劑盒

果膠裂解酶活性檢測試劑盒 果膠裂解酶活性檢測試劑盒