目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>果膠系列>> BC3680-50T/24S原果膠含量檢測試劑盒
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/24S |
| 貨號 | BC3680 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 原果膠含量檢測 |
原果膠含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC3680
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體100 mL×1瓶（自備） | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液三 | 液體50 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體60 mL×1瓶（自備） | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體3 mL×1瓶 | |
試劑三 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1,、 提取液一：80%乙醇,，自備。即將80 mL無水乙醇和20 mL蒸餾水混合,。
2,、 試劑一：濃硫酸60 mL，自備,。
3,、 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg半乳糖醛酸，臨用前加入0.943 mL提取液三,，配成50 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液,。
產(chǎn)品說明：
果膠是植物細(xì)胞壁主要組成成分之一，分為水溶性果膠和不溶性果膠,，不溶性果膠為原果膠,。原果膠是不溶于水的物質(zhì)，但可在酸,、堿,、鹽等化學(xué)試劑及酶的作用下，加水分解轉(zhuǎn)變成水溶性果膠,，在食品,、紡織、印染、煙草,、冶金等領(lǐng)域具有較廣泛的應(yīng)用,。
原果膠在堿性條件下水解為可溶性果膠，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為半乳糖醛酸,，產(chǎn)物在強酸中與咔唑縮合生成紫紅色化合物,，在530nm處有特征吸收峰。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計,、臺式離心機(jī),、水浴鍋、1mL玻璃比色皿,、可調(diào)式移液槍,、研缽/勻漿器、丙酮,、濃硫酸,、無水乙醇和蒸餾水。
操作步驟：
一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
取約0.1g樣本，加入1mL 提取液一,，室溫快速勻漿,，95℃水浴20min，冷卻至室溫,，4000g 25℃離心10min,，棄上清。沉淀加入1.5mL 提取液一和丙酮交替各洗2遍（渦旋振蕩2min左右,，4000g 25℃離心10min,，棄上清即可），沉淀即為粗細(xì)胞壁,，加入1mL提取液二（去除淀粉）浸泡15小時,，4000g 25℃離心10min，棄上清,，加入1mL提取液三,，充分勻漿。8000g 4℃離心10min,，取上清液待測,。
二、測定步驟
1,、 分光光度計預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至530nm,，蒸餾水調(diào)零。
2,、 將50μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液用提取液三稀釋為0.7,、0.6、0.5,、0.4,、0.2、0.1,、0.05,、0.025μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
3,、 操作表：
試劑名稱 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 對照管 | 測定管 |
樣本（μL） | - | - | 100 | 100 |
標(biāo)準(zhǔn)品（μL） | - | 100 | - | - |
蒸餾水（μL） | 100 | - | - | - |
試劑一（μL） | 800 | 800 | 800 | 800 |
混勻,、90℃放置10min,，取出后冷卻 | ||||
試劑二（μL） | - | - | 100 | - |
試劑三（μL） | 100 | 100 | - | 100 |
混勻,，25℃靜置30min后測定530nm處吸光值，分別記為A空白管,、A標(biāo)準(zhǔn)管、A對照管和A測定管,。ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管，ΔA測定=A測定管-A對照管,。 | ||||
三,、原果膠含量的計算
1,、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以各個標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸,，其對應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b,，將ΔA測定帶入方程得到x（μmol/mL）。
2,、 原果膠含量的計算：原果膠含量(μmol/g 質(zhì)量)=x×V提取液三÷W =x÷W
V提取液三：加入提取液三的體積,，1mL；W：樣本質(zhì)量,，g,。
注意事項：
1、 濃硫酸具有強腐蝕性,，操作時需特別注意,，90℃加熱取出后冷卻再打開蓋子，以防液體飛濺燒傷,。
2,、 若ΔA超過0.6，可將樣本用提取液三進(jìn)行適當(dāng)稀釋再進(jìn)行測定,，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù),。
實驗實例：
1. 取0.1g木槿加入1mL 提取液一，室溫快速勻漿,，95℃水浴20min,，冷卻至室溫，4000g 25℃離心10min，棄上清,。沉淀加入1.5mL 提取液一和丙酮交替各洗2遍（渦旋振蕩2min左右,，4000g 25℃離心10min，棄上清即可）,，沉淀即為粗細(xì)胞壁,，加入1mL提取液二浸泡15小時,，4000g 25℃離心10min,，棄上清,，加入1mL提取液三,，充分勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清液之后按照測定步驟操作,，測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.194-0.044=0.15,，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.9322x-0.0232,，計算X=0.1858μmol/mL,；按樣本質(zhì)量計算含量得：原果膠含量(μmol/g 質(zhì)量)= x÷W=1.858 μmol/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC2630/BC2635 果膠酶活性檢測試劑盒
BC4120/BC4125 可溶性果膠含量檢測試劑盒
BC2640/BC2645 果膠裂解酶（PL）活性檢測試劑盒
原果膠含量檢測試劑盒
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