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NADP-蘋果酸脫氫酶（NADP-MDH）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號：BC1050
規(guī)格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入250 μL雙蒸水,，用不完的試劑仍-20℃保存,；

2. 試劑三：臨用前加入300 μL雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存,。

產品說明：
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物,、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關鍵酶之一,，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反,，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸,。草酰乙酸是重要的中間產物，連接多條重要的代謝途徑,。因此,，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝,、蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng),、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,，MDH分為NAD^-依賴的MDH和NADP^-依賴的MDH,，NADP-MDH主要存在于真核細胞中。
NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋果酸,，導致340nm處光吸收下降,。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測,。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計,、低溫離心機、水浴鍋,、可調節(jié)移液器,、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器,、蒸餾水,。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件

注意事項：

1. 樣本的提取必須在0℃-4℃中操做完成，以防止酶變性失活,。

2. 實驗時,，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置,，以免變性和失活,。試劑一37℃放置。

3. 建議一人加樣一人比色。盡量保持反應溫度為37℃,。

實驗實例：

1. 取0.1g大鼠心臟組織加入1mL提取液進行勻漿研磨,，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定管=A1測定-A2測定=0.694-0.628=0.066,，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.652-0.643=0.009,，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.057，按樣本鮮重計算酶活得：

NADP-MDH（U/g 鮮重）=6430×ΔA÷W=6430×0.057÷0.1=3665.1 U/g 鮮重,。
參考文獻：

1. Yao Y X, Li M, Zhai H, et al. Isolation and characterization of an apple cytosolic malate dehydrogenase gene reveal its function in malate synthesis[J]. Journal of plant physiology, 2011, 168(5): 474-480.

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