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1,、植物組織蛋白質(zhì)提取方法
1,、根據(jù)樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入）,，準(zhǔn)備提取液放在冰上,。
2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時）,。
3、用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4,、提取上清夜,，樣品制備完成。
蛋白質(zhì)提取液：300ml
1,、1Mtris-HCl（PH8） 45ml
2,、甘油（Glycerol）75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g
這種方法針對SDS-PAGE,，垂直板電泳,！

2、植物組織蛋白質(zhì)提取方法
三氯醋酸—丙酮沉淀法
1,、在液氮中研磨葉片
2,、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下過夜，然后離心（4℃8000rpm以上1小時）棄上清,。
3,、加入等體積的冰浴丙酮（含0.07%的β-巰基乙醇），搖勻后離心（4℃8000rpm以上1小時）,，然后真空干燥沉淀,，備用。
4,、上樣前加入裂解液,，室溫放置30分鐘，使蛋白充分溶于裂解液中,，然后離心（15℃8000rpm以上1小時或更長時間以沒有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)）,，可臨時保存在4℃待用。
5,、用Brandford法定量蛋白，然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆谩?br />藥品：
提取液：含10%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮
裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中（終體積為5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml,。
這種方法針對雙向電泳,，雜質(zhì)少，離子濃度小的特點,！當(dāng)然單向電泳也同樣適用,，只是電泳的條帶會減少！

3,、組織：腸黏膜
目的：WESTERN BLOT檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
應(yīng)用TRIPURE提取蛋白質(zhì)步驟：
含蛋白質(zhì)上清液中加入異丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）
倒轉(zhuǎn)混勻,，置室溫10min
離心：12000 g，10min,，4度,，棄上清
加入0.3M鹽酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）
振蕩，置室溫20min
離心： 7500g,，5 min,，4度，棄上清
重復(fù)0.3M鹽酸胍/95％乙醇步2次
沉淀中加入100％乙醇 2ml
充分振蕩混勻,，置室溫20 min
離心： 7500g,，5min，4度,，棄上清吹干沉淀
1％SDS溶解沉淀
離心：10000g,，10min，4度
取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）
存在的問題：加入1％SDS后沉淀不溶解,，還是很大的一塊,，4度離心后又多了白色沉定，SDS結(jié)晶,？測濃度,，含量才1mg/ml左右。
解決：提蛋白試劑盒,，另外組織大小適中,，要碎，立即加2X BUFFER,，然后煮5－10分鐘,，效果很好的。

4,、植物材料：水稻苗,，葉鞘，根
1,、200毫克樣品置于冰上磨碎
2,、加lysis buffer,，離心，10000rpm,，4度,，5min取上清
3、重復(fù)離心5min
lysis buffer：urea   np-40  ampholine 2-me  pvp-40

5,、蛋白質(zhì)樣品制備
秧苗蛋白質(zhì)樣品的提取按Davermal等（1986）的方法進(jìn)行,。
100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40（聚乙烯吡咯烷酮）及少量石英砂，用液氮研磨成粉,，加入1.5 ml 10% 三氯乙酸（丙酮配制,，含10mM即0.07%β-巰基乙醇），混勻,，-20℃沉淀1小時,，4℃，15000 r/min離心15 min,，棄上清,，沉淀復(fù)溶于1.5ml冷丙酮（含10 mMβ-巰基乙醇），再于-20℃沉淀1小時,，同上離心棄上清,，（有必要再用80％丙酮（含10 mMβ-巰基乙醇所得沉淀低溫冷凍真空抽干。
按每mg干粉加入20μl（可調(diào)） UKS液[9.5 M尿素,，5mM碳酸鉀,，1.25%SDS，0.5%DTT（二硫蘇糖醇）,，2% Ampholine （Amersham Pharmacia Biotech Inc,，pH3.5-10），6% Triton X-100],，37℃溫育30min,，期間攪動幾次，28度 （溫度低,，高濃度的尿素會讓溶液結(jié)冰）16000 r/min離心15 min,，離心力越大時間長一點越好！上清即可上樣電泳,?；蛘?70度保存

6、植物根中蛋白質(zhì)的抽取
（1） sample, 液氮研磨
（2） 裝1.5 ml centrifuge 用tube
（3） 加 1M KH2PO4+K2HPO4 700 ul
（4） 12000 rpm, 4度, 10-15minite
（5） 取上層液,，蛋白質(zhì)就在里面