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1）致癌化學(xué)物轉(zhuǎn)化細(xì)胞：轉(zhuǎn)化敘利亞地鼠胚胎細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
1．取材：妊娠后第13天取材，取數(shù)個(gè)同窩胚胎,，去頭和內(nèi)臟,，在無(wú)菌條件下剪碎至米粒大小，再用0.25％胰蛋白酶（含0.01％EDTA）37℃消化30分鐘,，濾過(guò),、低速離心、吸除消化液,、加入營(yíng)養(yǎng)液,、制備成細(xì)胞懸液、接種入75cm/培養(yǎng)瓶中,，接種密度10～20×106/75cm,，37℃培養(yǎng)2～3天，在順利情況下能迅速長(zhǎng)滿瓶面,。
2．貯存：選大批生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞凍存,，儲(chǔ)以備用。
3．致癌物處理：取凍存細(xì)胞,，解凍,，接種于25ml培養(yǎng)瓶中，每瓶含細(xì)胞10萬(wàn)～30萬(wàn),。待細(xì)胞生長(zhǎng)進(jìn)入指數(shù)增生期時(shí),，向培養(yǎng)瓶中加入致癌劑MNNG。致癌劑量1～3微克/毫升營(yíng)養(yǎng)液,。在37℃溫箱中培養(yǎng)12～48小時(shí),。
4．低血清培養(yǎng)：棄掉MNNG作用液，用溫PBS洗1～3次,，加入含20％小牛血清,，繼續(xù)置溫箱中培養(yǎng)2～3周,，然后改用含5％血清培養(yǎng)液培養(yǎng)。低血清培養(yǎng)液不利于正常細(xì)胞生長(zhǎng),，但已轉(zhuǎn)化的細(xì)胞仍能增殖和形成轉(zhuǎn)化灶,。
5．轉(zhuǎn)化灶形成和分離：在成功情況下，用致癌物處理過(guò)的細(xì)胞于10天后在正常細(xì)胞之間,，可產(chǎn)生數(shù)量不等的轉(zhuǎn)化灶,。

2）病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞
1．血液制備：檸檬酸（Citric Acide）或肝素抗凝取血1～2ml，分裝入管中,，每管0.5ml全血,，置于4℃冰箱中30分鐘。
2．EBV病毒轉(zhuǎn)化：從液氮中取出凍存的0.5ml全血,，在37℃水中迅速解凍,。
3．將解凍細(xì)胞與10ml不含血清的RPMI 1640混合，2500 rpm離心2分鐘,，棄上清,，用含20％的胎牛血清、青,、鏈霉素和慶大霉素的RPMI 1640生長(zhǎng)培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
4．加入0.3～0.5ml的EBV病毒液,，37℃水浴30分鐘～2小時(shí),，并不時(shí)搖動(dòng)，以免出現(xiàn)凝塊,。
5．分裝入50ml的培養(yǎng)瓶中,，同時(shí)補(bǔ)加適量培養(yǎng)液，置入含5％CO2溫箱中,，100％溫度下培養(yǎng),。
6．一周后加補(bǔ)入2ml培養(yǎng)基。
7．經(jīng)常鏡檢培養(yǎng)物,，每3～4天加液或換液,，隨細(xì)胞數(shù)量增多，可分裝入大瓶中培養(yǎng),。

3）  癌基因轉(zhuǎn)化細(xì)胞：基因組DNA轉(zhuǎn)染法
1．提取基因DNA（含癌基因）,。
2．DNA準(zhǔn)備：取供體DNA50～100微克，加3M NaCl或醋酸鈉使終濃度至0.3M混勻,。
3．再加2倍體積無(wú)水乙醇,，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，去上清,。
4．加入轉(zhuǎn)染緩沖液,，待DNA充分融解后，再加入2.5M CaCl2，令終濃度為125mM,，用吸管輕輕吹打三次,。置室溫下10～30分鐘，待液體透明度降低,，出現(xiàn)微濁藍(lán)色時(shí),，即可用于轉(zhuǎn)染受體細(xì)胞。
5．細(xì)胞：取生長(zhǎng)狀態(tài)良好,、處于半?yún)R合階段的指數(shù)增生期細(xì)胞,，在轉(zhuǎn)染前24小時(shí)，更換培養(yǎng)液1次,。
6．轉(zhuǎn)染：向每瓶中加DNA－磷酸鈣沉淀物0.5～1ml/瓶,，置37℃作用4～6小時(shí)。
7．培養(yǎng)：棄去培養(yǎng)液,，用15％甘油處理3分鐘,，無(wú)血清培養(yǎng)漂洗1次，加入新培養(yǎng)液,，37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí),。
8．傳代：按1：5或1：10分瓶傳代，每2～3天換液1次,，接近匯合時(shí)血清用量降至5％,，培養(yǎng)2～3周。
9．檢測(cè)：逐日觀察,，待出現(xiàn)轉(zhuǎn)化灶后,，分離入另瓶中培養(yǎng)。