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人腮腺炎抗體IgG ELISA 檢測試劑盒

閱讀:2974      發(fā)布時間:2009-12-23
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人(Human)腮腺炎抗體IgGMumps-IgGELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用 標本:血清或血漿
 
試驗原理
Mumps-IgG試劑盒是間接法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知Mumps-IgG濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將Mumps-IgG和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后,加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A,、B,,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中Mumps-IgG的濃度呈比例關(guān)系,。
 
試劑盒內(nèi)容及其配制

試劑盒成份(2-8℃保存)
96孔配置
48孔配置
配制
96/48人份酶標板
1塊板(96T)
半塊板(48T)
即用型
塑料膜板蓋
1塊
半塊
即用型
標準品:40IU/L
1瓶(0.6ml)
1瓶(0.3ml)
按說明書進行稀稀
空白對照
1瓶(1.0ml)
1瓶(0.5ml)
即用型
標準品稀釋緩沖液
1瓶(5ml)
1瓶(2.5ml)
即用型
生物素標記的抗Mumps-IgG抗體
1瓶(6ml)
1瓶(3.0ml)
即用型
親和鏈酶素-HRP
1瓶(10ml)
1瓶(5.0ml)
即用型
洗滌緩沖液
1瓶(20ml)
1瓶(10ml)
按說明書進行稀釋
底物A
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)
即用型
底物B
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)
即用型
終止液
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)
即用型
標本稀釋液
1瓶(12ml)
1瓶(6.0ml)
即用型

 
自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul,、10ul,、50ul、100ul,、200ul、500ul,、1000ul,。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
 
安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A,、B,。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗,。
2. 實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。
 
操作注意事項
1. 試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,,不可保存,。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,,以免變質(zhì),。
3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A、B液時,,避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6. 洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
7. 底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
8. 加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9. 按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作,。
 
樣品收集、處理及保存方法
1,、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3,、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4,、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用,,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
 
試劑的準備
1. 標準品:標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備,不能儲存,。稀釋前將標準品振蕩混勻,。稀釋比例按下表中進行:

40 IU/L
(6號標準品)
原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
20 IU/L
(5號標準品)
100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
10 IU/L
(4號標準品)
100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
5.0 IU/L
(3號標準品)
100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
2.5 IU/L
(2號標準品)
100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
1.25 IU/L
(1號標準品)
100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 IU/L
(空白對照)
原始濃度不用稀釋直接加入50ul,。

 
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋,。
 
操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,,能使用復孔的盡量做復孔,。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育1小時,。
4. 甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育30分鐘,。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。
7. 每孔加入底物A,、B各50ul,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8. 取出酶標板,,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值,。
 
建議使用的實驗方案

 
標準品濃度(IU/L)
 
A
40
40
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
B
20
20
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
C
10
10
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
D
5.0
5.0
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
E
2.5
2.5
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
F
1.25
1.25
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
G
0
0
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
H
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品
樣品

 
 
局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的,,根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。
 
試劑盒性能
1. 靈敏度:小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應(yīng),。
3. 重復性:板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%。
 
結(jié)果 判 斷
1,、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD
 
2,、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應(yīng)的Mumps-IgG標準品濃度為橫坐標(X),,做得相應(yīng)的曲線,,樣品的Mumps-IgG含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度。
 
3,、檢測值范圍:0-40IU/L
 
4,、敏感度: 0.1 IU/L
 

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