人CTGF定量EIA試劑盒使用說明
原理
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-EIASA法,。用抗人CTGF單抗包被于酶標(biāo)板上,，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的CTGF與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人CTGF,，形成免疫復(fù)合物連接在板上,，辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入酶底物TMB,，出現(xiàn)藍(lán)色,，加終止液硫酸，顏色變黃,，在450nm處測(cè)OD值,，CTGF濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的CTGF濃度,。
試劑盒組成
1． 96孔微孔板：一塊,，已包被抗人CTGF單抗。
2． 樣品稀釋液：一瓶
3． *抗體工作液：一瓶
4． 酶標(biāo)抗體工作液：一瓶
5． 底物稀釋液：兩瓶
6． 終止液：一瓶
7． 洗滌液（20X）：一瓶
8． 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干粉,，2000ng/ml ）：一管
9． 坐標(biāo)紙：一張
準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1． 洗滌液：用重蒸水1：20稀釋,。
2． 收集血液標(biāo)本：采集血清或培養(yǎng)液盡早檢測(cè)，2-8℃保存一天,；需更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃）保存,，避免反復(fù)凍融。
3． 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前每管中加入100ul蒸餾水溶解后即可,。
4． 底物工作液配制：使用前將OPD片放入底物稀釋液中溶解,，每片加液5ml。
檢測(cè)程序
1． 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔8孔,，每孔中各加入樣品稀釋液100ul,，*孔加標(biāo)準(zhǔn)品100ul，混勻后用加樣器吸出100ul,，移至第二孔,。如此反復(fù)作倍比稀釋至第七孔，后,，從第七孔中吸出100ul棄去,，使之體積均為100ul,。第八孔為空白對(duì)照。
2． 加樣：待測(cè)品孔每孔各加入待測(cè)樣品100ul,。
3． 將反應(yīng)板充分混勻后置37℃ 120分鐘,。
4． 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4－6次，向?yàn)V紙上印干,。
5． 除空白孔外,，每孔中加入*抗體工作液50ul。
6． 將反應(yīng)板置37℃ 60分鐘,。
7． 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4－6次,，向?yàn)V紙上印干,。
8． 除空白孔外,，每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。
9． 將反應(yīng)板置37℃ 60分鐘,。
10．洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4－6次,，向?yàn)V紙上印干
11．每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)5－15分鐘（視顏色深淺靈活掌握）,。
12．每孔加入50ul終止液混勻,。
13．在450nm處測(cè)吸光值。
結(jié)果計(jì)算與判斷
1． 所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算,。
2． 以標(biāo)準(zhǔn)品1000,、500、250,、125,、62、31.25,、15.63,、0ng/ml之OD值在半對(duì)數(shù)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
3． 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CTGF含量,。
注意事項(xiàng)
1． 本試劑盒宜置-20℃冰箱保存。
2． 本試劑盒取出的試劑在室溫條件下使用,，溶液應(yīng)輕輕搖勻后使用,。
3． 本試劑盒含2M硫酸，不要將它與含疊氮鈉的廢物混在一起,。
4． 板條開封后剩余板條要再封好,，保持板條干燥。
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