EIASA法檢測白細胞介素-8

    IL-8來源于單個核細胞，其主要的生物學(xué)活性有：引導(dǎo)嗜中性粒細胞趨化、脫粒、釋放溶菌酶，加強炎癥防護；促進嗜堿性粒細胞趨化,、脫粒、釋放組胺，加強過敏反應(yīng),；使T細胞趨化,、游走，加強免疫,。HBV感染能誘導(dǎo)肝細胞合成大量TNF-a,，而TNF-a又可誘導(dǎo)肝細胞合成IL-8，IL-8促進肝內(nèi)炎癥反應(yīng),，介導(dǎo)肝細胞損傷,，誘導(dǎo)各類細胞分化增殖，從而使慢性肝臟炎癥持續(xù)存在,，并導(dǎo)致纖維化形成,。HCV感染能使機體細胞毒T淋巴細胞產(chǎn)生TNF-a、IL-8等多種促炎細胞因子,，從而誘導(dǎo)肝損傷,。

    [檢測方法]  EIASA法

    [方法學(xué)原理]  在微孔反應(yīng)板上包被抗人IL-8單克隆抗體，待測標本和標準晶中的IL-8會與抗人IL-8單克隆抗體結(jié)合,，游離的成分被洗去,，同時加入生物素化的抗人IL-8抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。生物素與親和素特異結(jié)合,，抗人IL-8抗體與結(jié)合在單克隆抗體上的人IL-8結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,，游離的成分被洗去。加入顯色劑,，若反應(yīng)孔中有IL-8,，HRP會使五色的顯色劑呈現(xiàn)藍色，加終止液變黃色,。在波長450nm處測吸光度,，IL-8濃度與吸光度成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中的IL-8濃度,。

    [標本準備]  靜脈采血2ml,，不抗凝

    [試劑]

    1．預(yù)包被微孔反應(yīng)板

    2．濃縮酶結(jié)合物

    3，酶結(jié)合物稀釋液

    4．標準品和標本稀釋液

    5．濃縮生物素化抗體

    6．IL-8標準晶

    7．濃縮洗滌液

    8．顯色劑A,、B

    9．終止液

    [儀器]  酶標儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀,。

    [檢測步驟]

    1．在微孔反應(yīng)板相應(yīng)孔中分別加入待測樣本、不同濃度標準品100ul,，再加生物素化抗體工作液50ul,。

    2．振蕩混勻，置20～25℃環(huán)境中溫育120min,。

    3．將孔內(nèi)液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥,。

    4．除空白孔外,，加入酶結(jié)合物工作液100ul。

    5．振蕩混勻,，置20-25℃環(huán)境中溫育30min,。

    6．將孔內(nèi)液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次,，干燥,。

    7．每孔加入顯色劑A、B各50ul,，輕輕振蕩混勻,，37℃環(huán)境中避光顯色10min。

    8．加入終止液50ul后,，輕輕振蕩混勻,。用酶標儀（450nm波長）測定各孔吸光度，與標準曲線對照,，求出IL-8水平,。

    [正常參考值]  各實驗室可根據(jù)檢測方法的不同確立正常參考值。

    [注意事項]

    1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30min后方可使用,，未用完的微孔條用自封袋密封保存,。

    2．酶標板洗滌時各孔均需加滿洗滌液，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈,。應(yīng)設(shè)定30～60s的洗滌浸泡時間,。

    3．滴加試劑前應(yīng)將滴瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體混勻,。滴加時瓶身應(yīng)保持垂直,，以使滴量準確。

    4．所有樣品和廢棄物都應(yīng)按傳染源處理,。終止液為2mol／L硫酸,，使用時應(yīng)注意安全。

    5．每批樣本應(yīng)同時做標準曲線,。

    [臨床意義]  慢性活動性肝炎患者血清IL-8水平上升,，且與病情相一致。急性白血病患者外周血IL-8水平明顯高于正常人,；動態(tài)觀察骨髓移植患者血清IL-8水平有助于預(yù)測干細胞移植后粒細胞的恢復(fù)期,；監(jiān)測血清IL-8水平還可預(yù)測感染。

廈門慧嘉生物科技有限公司專業(yè)提供各品牌ELISA試劑盒

詳情請登入: http://www.biohj.com

查詢,，或    ：[email protected]