ELISA法檢測白細胞介素-6

    IL-6是單核巨噬細胞,、血管內(nèi)皮細胞、成纖維細胞等受IL-1刺激而產(chǎn)生的細胞因子，某些活化的T細胞亦能產(chǎn)生,。IL-6的主要生物學活性有：促使活化的B細胞分化,，刺激T細胞、胸腺細胞和骨髓造血干細胞增殖,，誘導肝細胞產(chǎn)生某些急性期蛋白（如血漿纖維蛋白原）,。

    [檢測方法]  ELISA法

    [方法學原理]  在微孔反應板上包被抗人IL-6單克隆抗體，待測標本和標準品中的IL-6會與抗人IL-6結(jié)合,，游離的成分被洗去,，同時加入生物素化的抗人IL-6抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。生物素與親和素特異結(jié)合,，抗人IL-6抗體與結(jié)合在單克隆抗體上的人IL-6結(jié)合而形成免疫復合物,，游離的成分被洗去。加入顯色劑,，若反應孔中有IL-6,，HRP會使五色的顯色劑呈現(xiàn)藍色，加終止液變黃色,。在波長450nm處測吸光度,，IL-6濃度與吸光度成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中的IL-6濃度,。

    [標本準備]  靜脈采血2ml,，不抗凝。

    [試劑]

    1．預包被微孔反應板

    2．濃縮酶結(jié)合物

    3．酶結(jié)合物稀釋液

    4.標準品和標本稀釋液

    5．濃縮生物素化抗體

    6．IL-6標準品

    7．濃縮洗滌液

    8．顯色劑A,、B

    9．終止液

    [儀器]  酶標儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀,。

    [檢測步驟]

    1．在微孔反應板相應孔中分別加入待測樣本、不同濃度標準品100ul,，再加生物素化抗體工作液50rd,。

    2．振蕩混勻，置20～25℃環(huán)境中溫育120min,。

    3．將孔內(nèi)液體吸干,，用洗滌液充分洗滌5次，干燥,。

    4．除空白孔外,，加入酶結(jié)合物工作液100ul。

    5．振蕩混勻,，置20-25℃環(huán)境中溫育30min,。

    6．將孔內(nèi)液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次,，干燥,。

    7．每孔加入顯色劑A、B各50fA，輕輕振蕩混勻,，37C環(huán)境中避光顯色10min,。

    8．加入終止液50t~l后，輕輕振蕩混勻,。用酶標儀（450nm波長）測定各孔吸光度,，與標準曲線對照,，求出IL-6水平,。

    [正常參考值]  各實驗室可根據(jù)檢測方法的不同確立正常參考值。

    [注意事項]

   1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出時應在室溫環(huán)境中平衡30rain后方可使用,，未用完的微孔條用自封袋密封保存,。

    2．酶標板洗滌時各孔均需加滿洗滌液，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈,。應設定30-60s的洗滌浸泡時間,。

    3．滴加試劑前應將滴瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體混勻,。滴加時瓶身應保持垂直,，以使滴量準確（注意：勿將試劑滴在孔壁上）。

    4．所有樣品和廢棄物都應按傳染源處理,。終止液為2mol／L硫酸,，使用時應注意安全。

    5．每批樣本應同時做標準曲線,。

    6．檢測劑工作液按說明書臨用前配置,。

    7．若標本OD值在標準曲線測定范圍以外，應適當稀釋后重測,。

    [臨床意義]  某些病毒性疾病中,，如重癥肝炎、慢性病毒性肝炎時,，患者血清IL-6水平升高,，與ALT的升高基本保持一致。在其他急性細菌性,、病毒性感染中血清IL-6水平未見明顯改變,。

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