IL-4抗CD23單抗檢測(cè)法

    IL-4能促進(jìn)B細(xì)胞膜表面CD23分子表達(dá),，一些BurkittB淋巴細(xì)胞瘤株（如Jijoy細(xì)胞）未受刺激時(shí)，CD23表達(dá)水平很低,，經(jīng)IL-4刺激后，CD23的表達(dá)呈劑量依賴性增加。用抗CD23單抗間接免疫熒光法染色,，可檢測(cè)人IL-4活性。

    （1）將5X105／mL的Jiioy細(xì)胞培養(yǎng)于含10％FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液中,。

    （2）取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞,，用新鮮培養(yǎng)液將細(xì)胞配成5X 105／mL，接種于24孔板中,，lmL／孔,。分別加待測(cè)標(biāo)本及標(biāo)準(zhǔn)IL-4（不同稀釋度），并設(shè)陰性對(duì)照,，培養(yǎng)48～72h,。

    （3）洗細(xì)胞2次，以106—107／mL濃度的細(xì)胞重懸于含1％BSA,，2mmoL／L疊氮鈉的PBS中,。將細(xì)胞轉(zhuǎn)人Falcon分析管中，離心棄PBS,，加100~L抗CD23單抗（5—10btS／mL）,，置冰浴中15～30rain，用上述PBS洗2次,。

    （4）加適當(dāng)稀釋的FITC標(biāo)記的羊抗鼠IgC,，置冰浴15～30rain，同上洗細(xì)胞,，重懸細(xì)胞于含2mmol／mL疊氮鈉的PBS中,。

    （5）用流式細(xì)胞儀分析CD23分子的表達(dá),，以陽性細(xì)胞百分率表示，并計(jì)算IL-4活性單位,；或用熒光顯微鏡觀察CD23分子的表達(dá),。

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